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测定蛋白质相对分子质量

一、前言

聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳，

简称

PAGE,

是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介

质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙

烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法

有两种

:

化学聚合法和光聚合法。

化学聚合以过硫酸铵

(APS)

为催化剂，

以四甲基乙二胺

(TEMED)

为加速剂。在聚合过程中，

TEMED

催化过硫酸

铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与

丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

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根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，

连续系统电泳体系中缓冲液

pH

值及凝胶浓度相同，

带电颗粒在电场作

用下，

主要靠电荷和分子筛效应。

不连续系统中由于缓冲液离子成分，

pH

，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有

电荷效应，

分子筛效应，

还具有浓缩效应，

因而其分离条带清晰度及分

辨率均较前者佳。

不连续体系由电极缓冲液、

浓缩胶及分离胶所组成。

浓缩胶是由

AP

催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为的

Tris-HCl

。

分离胶是由

AP

催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为

Tris-HCl

。电

极缓冲液是

Tris-

甘氨酸缓冲液。

2

种孔径的凝胶、

2

种缓冲体系、

3

种

pH

值使不连续体系形成了凝胶孔径、

pH

值、缓冲液离子成分的不连续

性，这是样品浓缩的主要因素。