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a. 为了获得最理想的试验结果,我们建议在Opti-MEM培养基中混合脂质体和DNA。 另一种方法是使用无血清培养基。 b. 在Opti-MEM培养基中稀释脂质体。 在第二管Opti-MEM培养基中稀释DNA,然后和等体积脂质体溶液混合。 该2步稀释法可获得更优质的数据,比脂质体直接加入稀释的DNA中的方法获得的结果更有重复性。 c. 脂质体一旦在Opti-MEM培养基中稀释,在加入稀释的DNA之前,推荐孵育时间为2- 5分钟。 稀释的脂质体孵育时间不要超过20]分钟。 d. DNA的Opti-MEM溶液更加稳定,最早可以提前4小时制备,但不要太早。 e. 等体积稀释的脂质体和DNA溶液等体积混在一起后,通过缓慢地上下吹打来混合溶液,也可轻弹试管底部,或者快速涡旋混合。 f. 脂质体/DNA复合物温育5-10小时后,将复合物转移到含有细胞和生长培养基的孔中。 将复合物滴加到培养基上,然后轻轻地晃动板子。 切勿剧烈地将孔中的脂质体/DNA复合物分散,否则会使细胞移位。 |
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