柴胡属药用植物的鉴别研究

中药柴胡首载于《神农本草经》,列为上品,在我国的使用已有两千多年的历史。柴胡具有和解表里、疏散退热、疏肝解郁、升阳举气之功效,用于治疗感冒发热、寒热往来、胸满胁痛、口苦耳聋、头痛目眩、月经不调、子宫脱垂、脱肛等症。2015版《中国药典》规定柴胡的来源为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根[1]。但在地方实际用药中经常会把柴胡属其他品种的药材当柴胡用,非常混乱,其主要原因是柴胡属植物的品种较多,分布又广,适应能力强,因此在实际应用中很可能由于辨识不清而被入药[2],虽然多为柴胡属植物混用,但其中有效成分的差异很容易造成柴胡及其制品质量的不稳定。因此,探讨正品柴胡的品种鉴别问题有着重要的意义。

柴胡属(Bupleurum L.)属于伞形科(Umbelliferae)芹亚科(Apioideae)阿米芹族(Ammineae Koeh),始载于Linnaeus1737年发表的《植物属志》 [3],模式种为圆叶柴胡B.rotundifoliumL。全世界约200多种,据潘胜利等人的报道,中国分布有柴胡属植物42种、17变种、7变型,其中药用的柴胡有25种、8变种、3变型[4],并且分布非常广泛,北起内蒙古、黑龙江,南至海南岛、广东、广西和云贵高原,西连青藏高原和新疆,东达江浙闽和台湾,均有柴胡的分布,其中甘肃柴胡属植物共计21种,其中作药用的有13种[5];云南作药用的共计8种;宁夏作药用的有10种[6]等。目前,随着对野生柴胡开发利用的扩大,国内外需求的增加,野生资源濒临枯竭,栽培柴胡成为当今商品柴胡的主要来源之一[7],调查结果显示栽培北柴胡种植面积较大的是甘肃、陕西、山西、河南、河北,内蒙也有分布;栽培南柴胡种植面积较大的是黑龙江;栽培三岛柴胡主要在河北安国、湖北英山等地,三岛柴胡目前主要被外商收购[8]。详见表 1。

柴胡作为一味中药材,其生长环境导致柴胡的植被特点、成药形态等存在一定的差异性,从而也导致了柴胡的种类有很多种。目前市场上柴胡药材主要有北柴胡类、红柴胡类和竹叶柴胡类,此外尚有黑柴胡类和春柴胡类[14],只有伞形科北柴胡和南柴胡为国家规定的柴胡正品来源,而中药材各地方标准却收载了多种可药用的柴胡,收载情况也较为复杂[15]。详见表 2。

柴胡来源复杂,市场销售混乱,关于药用柴胡混淆品的鉴定也很多,如李明芳[16]、童静玲[17]等均对常用的柴胡药材从产地、性状、显微等方面进行鉴定;严华[18]等建立了南柴胡与混伪品锥叶柴胡的鉴别方法;魏志莉[19]等对北柴胡的栽培品与野生品进行品质比较等,虽然中药材的鉴定手段不尽相同,但传统的鉴定方法依旧为最基本的鉴定方法。

性状鉴定是用看、摸、闻、尝等十分简便的鉴定方法,来鉴别药材的外观性状,这些方法在我国的传统医药学中积累了丰富的鉴别经验,具有简单、易行、迅速的特点。目前,在使用习惯上,北方地区习用根,西南地区习用全草,华东和华南地区则二者并用[20]。柴胡性状的种间差异特征主要在根外形、支根多少、表面色泽、残留茎基和叶基数量、质地及气味等,同时根据药用部位的不同也可对柴胡药材进行初步的鉴定。详见表 3。

显微鉴定是中药鉴定的重要手段之一,利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状以及内含物的特征,达到鉴定药材的真伪、纯度和品质的目的。柴胡属植物根的组织大致相似[31],研究显示药用柴胡根的横切面中木栓细胞的列数,韧皮部油管的有无、多少和大小,木化纤维群的排列和位置,大口径导管的排列方式等与柴胡的好坏优劣存在着一定的联系[32],也可作为柴胡生药鉴别的参考,但粉末显微差异不甚明显。详见表 4。

2015版药典规定柴胡药材的薄层鉴别以柴胡皂苷a、d为指标,研究表明柴胡属植物几乎均含有柴胡皂苷a、d,且成分相差不大,多为含量差异[39],其中多枝柴胡、韭叶柴胡、汶川柴胡、丽江柴胡等皂苷含量明显高于药典规定,锥叶柴胡a的含量显著低于d的含量,但成分与北柴胡又有不同,显示斑点多于对照药材;滇柴胡不含柴胡皂苷a等。因此,柴胡皂苷成分的不同,含量的差异在薄层色谱图中会有直观的表现。表 5则以北柴胡皂苷a、c、d为参照对比柴胡属药用植物皂苷含量的大体趋势,可作为比较柴胡薄层鉴别不同的依据。

中药柴胡品种繁多,习用品、代用品以及多基原、同名异物、同物异名等混乱问题一直是影响中药安全有效的主要问题之一[45],目前对柴胡的鉴定手段多种多样,如利用DNA条形码技术、分子标记技术、化学特征图谱技术等[46],可有效地对药材品种进行区分,其中基于DNA条形码鉴定技术是极富潜力的新手段之一。袁伯川等[47]对168株柴胡属药用植物基于ITS序列分析确定了19种ITS单倍型,并最终发现ITS序列能实现常见的7种柴胡属药用植物的高效鉴定;丁俊林等[48]基于ITS2序列构建柴胡及大叶柴胡的NJ系统聚类树显示大叶柴胡独自聚为一支,可明显与柴胡区分;谢辉等[49]通过分析9种柴胡属药用植物rDNA ITS序列的差异和规律得出同源比对相似性大于88%可认定为同属植物,大于99%可作为种认定的指标,但要对所有柴胡药材准确鉴定,仍需与其它性状相结合。

基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定等传统鉴定方法虽然存在一定局限性,但仍是鉴定手段中不可获缺的方法,特别是药材的性状鉴别仍是初步判断药材品种的首要信息。其次,通过显微鉴别对药材内在组织构造进行进一步确认,如马长宝[50]等根据柴胡属植物的果实形态学特征和解剖学特征对21种柴胡进行分类,为柴胡的鉴定提供参考。最后,通过薄层鉴别、理化鉴别对药材成分进行初步的对比,来确定其来源及物种。因此,采用从性状、显微到成分的多重指标控制为柴胡的质量研究提供合理依据,为柴胡生药鉴定提供参考仍然必不可少。