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这些免疫共沉淀实战技巧,师兄师姐一定不会告诉你

2023-07-31 05:16| 来源: 网络整理| 查看: 265

那么知道了原理,我们可以先在网上找几个视频看看,从视频中我们知道了 CoIP 的原理,以及做 CoIP 都需要什么,那么我们就动手准备吧。

磁力架这个东西其实很简单,如果有钱的话建议直接买 CoIP 试剂盒,一般是会送磁力架的,如果没钱那就 DIY 一个吧。

先从网上下载一个磁力架的 3D 文件,送某宝 3D 打印出来,再买点小磁铁装进去就 ok 了,下图是效果图。

然后从实验室找到一个老式的 DNA 混合仪,用热熔胶粘一块浮漂板上去,这样 EP 管混合器就搞定了。

至于磁珠,因为周围的代理商很少卖这个东西,都不甚了解,于是去丁香通看看,搜索「IP 磁珠」,正好看见第一个是金牌供应商,点击一下联系厂家,不久厂家来电,先不着急下单,可以问问这个实验相关的问题,然后问问有没有试用装,索要一点试用装先试试。

至于 ProteinA 和 G 如何选择需要看你的抗体是什么类别,有的和 A 结合能力强,有的和 G 结合能力强,比如抗体来源是 mouse IgG2b,选 A 或 G 的磁珠都可以。

过了几天,磁珠到手了,根据说明书配置了三种 pH 不同的缓冲液,都是常规试剂,配完之后用盐酸滴定一下 pH 就 ok 了。接下来按照说明书的步骤操作就可以了。但开始之前我们还需要看看 CoIP 的对照组怎么设置,如果没有对照,跑出来的条带也不知道是不是我们想要的结果啊。

这里隆重给大家推荐一个来自 NIH 的神器:Openi。貌似知道的同学还不多。这个网站可以直接搜索论文里的图片,比一篇篇去找文献方便多了。于是我们搜索「CoIP」,得到很多的结果,随便找几个看看就知道该如何设置对照了。

这样万事具备之后我们就开始吧,提蛋白,制作磁珠抗体复合物,然后 CoIP,SDS-PAGE,再 WB 检测,抗体孵育过夜。第二天结果出来了,效果很明显,原来蛋白 B 的抑制剂间接促进了蛋白 B 和蛋白 C 的结合,有了这样的结果,文章档次一下子就上去了。

大家有没有 get 到精髓啊?是不是已经跃跃欲试了?先且慢,福利来了,毛老师一共做了 4 个磁力架,自己留一个用,其余 3 个就送给各位学霸朋友吧。

规则很简单,评论区点赞数前三名可免费获得 DIY 磁力架一个以及本文作者亲笔填写的快递单哦,快来留言吧。需要 CoIP 视频及磁力架 3D 打印文件的同学请到后台回复 CoIP获取下载地址。

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