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酶联免疫试剂盒（ELISA）试验结果分析方法
酶联免疫试剂盒（ELISA）试验分析方法:1、 标准曲线的测定，标准曲线至少由5个浓度组成，测定次数不少于5次，以确定工作浓度范围和IC50范围。一般临界值为IC50附近，检测灵敏度高。2、 样品检测限的测定。3、 样品添加回收实验。对禁用药物可添加定量限和2倍定量限，对于有zui高残留限量(MRL)的药物，可添加MRL和MRL上下各一个浓度。准确度：若回收率大于40％符合相应检测标准的要求。精密度：批内变异系数每批平行样之间的变异系数小于或等于25％，对于禁用药物小于或等于30％。批间变异系数所有样品间变异系数小于或等于30％，对于禁用药物小于或等于40％。满足以上准确度和精密度要求，说明ELISA方法可行，可用来检测药物残留。4、 对于可用于多残留检测的试剂盒，以交叉反应率低的药物做阳性添加测定临界值(cut-off)。5、 实际检测样品时要包括以下实验：至少做两条标准曲线，两个阴性对照品，两个添加临界值(cut-off)的阳性对照品，两个平行的待检样品。检测结果出来后通过标准曲线形状(符合检测要求为S形)，IC50与临界值是否相近及阳性样品回收率，样品平行情况可确定检测是否可信。  酶联免疫试剂盒（ELISA）试验结果的建议： 1. ELISA实验中样品都要做复孔或三孔，然后计算每个浓度标准品的平均OD值，复孔的变异系数应该小于20%。 2. 平均OD值减去空白孔的OD值。 3. 制作标准曲线。 以减去本底后的OD值为X轴，标准品的浓度为Y轴，利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图，比如CurveExpert 1.4。这款软件能够给出很多种方法（比如直线、半对数、对数、四参数方程等）并从中选择一条最合适的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据吻合，可以将标准品的浓度作为未知数，将对应的OD值带入该方程，计算出标准品的浓度，得到的结果应该与实际浓度很接近（+/-10%）。选择拟合度最高的那条曲线。 |
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