支原体培训资料PPT资料.ppt

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报告Uu和Mh阳性不明显时不易观察结果，容易漏检，且不能够提供药敏情况以指导临床用药。

分子生物学方法v支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应（PCR）等方法。

v基因探针的核酸杂交法，虽然敏感性和特异性都很高，但基因探针常用同位素标记，放射性危害大，设备要求高且繁琐难以推广。

v近年来发展的PCR技术，使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异，为支原体的检测和实验研究开辟了一个广阔的前景。

v目前已经有商品化试剂盒出现的荧光定量PCR技术（FQ-PCR）具有较高的敏感性和特异性，兼具定量的特点。

但其不能对治愈状况进行判断，因此对于临床仅具有鉴定的意义，而不能用于判断疗效。

v分子生物技术的开展要求有较高的实验环境和设备，目前来说很难在临床大范围推广。

方法项目液体培养固体培养ELISA核酸杂交PCRPCR-ELISA检测对象活体活体抗原或抗体DNA片断DNA片断DNA片断敏感性好一般一般差较好较好特异性较好好差一般差较好操作过程简便简便较好一般一般差检测需要时间48小时3-5天1-2小时数小时数小时数小时专用仪器设备不需不需酶标仪电泳设备PCR仪电泳设备PCR仪酶标仪药物敏感性试验能能不能不能不能不能计数能能不能不能不能不能各种检测方法的比较第三部分产品介绍丽珠泌尿生殖道支原体诊断系列解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒（冻干型）解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒（液体型）（MycoplasmaICS）解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒（Uu&MhMediaKit）解脲脲原体分离培养基试剂盒（UuIsolationMediaKit）人型支原体分离培养基试剂盒（MhIsolationMediaKit）试剂盒组成v冷冻干燥培养基20个含营养物质、底物、抑菌剂、杀菌剂、指示剂等成分v稀释液10ml/瓶7瓶主要含指示剂，用于冷冻培养基的溶解v试剂条20条每个试剂条含有24个微孔v无菌石蜡油10ml/瓶2瓶起密封作用v说明书1份v报告单、报告单各20张v吸头20个试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成检测原理v试剂盒主要由选择性培养基和试剂条组成。

v培养基中含有蛋白胨、酵母抽提物、马血清、生长因子等营养物，并加有尿素、精氨酸及酚红指示剂，当有Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸被分解生成碱性物质而引起PH值上升，培养基由黄色变成红色。

标本采集：

标本冻干培养基的稀释：

冻干培养基的稀释：

稀释液培养基接种接种与培养：

与培养：

培养基标本石蜡油接种到试剂条除C-外各孔中50l2350l23每孔一滴解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒结果判断结果判断C孔（空白孔）阴性（）,试验有效,判断余下各孔结果C孔（空白孔）阳性（）,表示污染,试验无效C孔（对照孔）阳性（）,有Uu和（或）Mh生长,判断试剂条余下各孔结果.C孔（对照孔）阴性（-）,报告Uu和Mh阴性结果。

解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒结果判断结果判断结果判读表试剂孔编号阳性阴性结果判断质控孔1.C-空白孔红黄阳性：

试验无效阴性：

判断余下各孔结果2.C对照孔阳性：

判断余下各孔结果阴性：

v同时，培养基中加有抑菌剂、杀菌剂，可抑制或杀灭泌尿生殖道中细菌和真菌的生长。

v试剂条的各孔分别用于质控对照以及Uu和Mh的培养鉴定、半定量计数和药物敏感性实验。

从上至下，从左至右编号：

3号孔：

林可霉素4号孔：

红霉素5号孔：

林可霉素、Uu抑制剂6号孔：

红霉素、Mh抑制剂101044C-C-CCUuUuMhMhUuUuMhMh101044质控部分鉴定与半定量计数部分药物敏感性试验部分空白孔对照孔LLHH解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒试剂盒组成试剂盒组成药物敏感性试验英英文文名名中中文文名名类类别别作作用用机机理理DoxycyclineDoxycycline强力霉素强力霉素半合成四环素类半合成四环素类作用于菌体作用于菌体RNARNA，阻止肽链合成阻止肽链合成MinocyclineMinocycline美满霉素美满霉素半合成四环素类半合成四环素类AzithromycinAzithromycin阿奇霉素阿奇霉素第二代大环内脂类第二代大环内脂类抑制菌体蛋白抑制菌体蛋白的早期合成的早期合成JosamycinJosamycin交沙霉素交沙霉素第一代大环内脂类第一代大环内脂类ClarithromycinClarithromycin克拉霉素克拉霉素第二代大环内脂类第二代大环内脂类RoxithromycinRoxithromycin罗红霉素罗红霉素第二代大环内脂类第二代大环内脂类OfloxacinOfloxacin氧氟沙星氧氟沙星第三代氟喹诺酮类第三代氟喹诺酮类干扰菌体干扰菌体DNADNA旋转酶，旋转酶，阻止菌体蛋白合成。

阻止菌体蛋白合成。

LevofloxacinLevofloxacin左旋氧氟沙星左旋氧氟沙星第三代氟喹诺酮类第三代氟喹诺酮类SparfloxacinSparfloxacin司帕沙星司帕沙星第三代氟喹诺酮类第三代氟喹诺酮类解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒试剂盒组成试剂盒组成-尿液-尿道分泌物-前列腺液-精液-宫颈分泌物无菌涤纶拭子采集检测方法检测方法标本采集：

是支原体鉴定方法的“金标准”。

能够通过显微镜下观察支原体菌落的生长准确判断出支原体的感染情况，具有很高的特异性和敏感性。

还可同时观察多种病原体菌落的生长情况。

v缺点：

该方法临床诊断耗时较长.支原体生长过程需要CO2等，培养过程中菌株容易死亡，给临床使用带来极大不便，不能够提供药敏情况，无法对临床用药给以指导.因此该方法不适用与临床常规检测，仅作为评价其他方法的一个标准。

培养法培养法尿素酚红指示剂精氨酸酚红指示剂UuUu的培养的培养MhMh的培养的培养培养基培养基培养法培养法分解利用产生NH3，使PH值升高（22）液体培养法）液体培养法v优点：

优点：

操作方法简单，用时较短，结果易于观察，准确性好，同时可一次检测出药敏情况，为临床用药提供了客观依据，有效减少了由于抗生素滥用造成的耐药性增加，减轻了患者的治疗负担。

缺点：

若标本中含有能分解尿素或精氨酸的细菌、有真菌污染或被污染，都可能造成实验结果的假阳性。

vMhMh在人群中的分离率较低在人群中的分离率较低，Mh在男性NGU（非淋菌性尿道炎）的发病过程中并不十分重要，而在女性泌尿生殖道感染中起重要作用，但由于检测试剂的质量参差，其感染往往被忽视。

vUu和Mh主要通过性接触和母婴传播。

支原体感染的实验室诊断第二部分培养法：

液体培养法和固体培养法抗原检测分子生物学方法：

核酸杂交技术、PCR等支原体常见实验室诊断方法vv由于在人群中存在由于在人群中存在Uu&MhUu&Mh的无症状携带者及低滴度的无症状携带者及低滴度抗体，所以抗体，所以Uu&Mh的血清学检查法极少使用；的血清学检查法极少使用；vv最常用的实验室诊断是培养最常用的实验室诊断是培养、药敏试验；标本中的抗药敏试验；标本中的抗原的检测；核酸成分的检测等。

原的检测；培养法v支原体感染的实验室诊断以往主要依靠分离培养作为检测到病原体存在的直接证据，培养法也被视为标准方法。

v支原体中以解脲脲原体Uu（生长过程中需要分解尿素），人型支原体Mh（需要分解精氨酸）最为常见，而目前商品化的肉汤培养基也都是基于这个原理制成的。

分为液体培养法和固体培养法。

（1）固体培养法v原理：

固体培养基一般为含有多胨等营养成分、细胞培养液、抑菌剂等成分的琼脂培养基，标本接种后在CO2环境下培养，于显微镜下观察有无解脲脲原体棕黑色海胆状菌落和人型支原体油煎蛋状菌落。

v优点：

同时据文献报道，也可能存在不分解尿素的Uu，造成检测结果的假阴性。

培养法培养法（3）液体-固体两步培养法v原理：

标本首先用液体培养基进行初筛，将初筛阳性者转种至固体培养基上培养鉴定。

结合了液体培养法和固体培养法的优点，具有很高的特异性，可有效减少假阳性结果的产生。

该种方法操作繁琐，耗时长，且由于Uu生长繁殖所需PH值为6.0，Mh生长繁殖所需PH值为7.0，在液体培养基中随着PH值的升高，会造成支原体的死亡，由此将其转种至固体培养基上后造成假阴性的结果。

培养法血清学方法v支原体特异性血清学方法中，常用的有补体结合实验，间接免疫荧光染色检查法，生长抑制试验，代谢抑制试验，酶免疫测定等。

以免疫斑点法为例，v原理：

原理：

反应板上的固相普通型Uu混合抗原特异地与人血清中的抗Uu抗体IgG结合形成复合物，胶体金标记的抗人IgG抗体再与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑。

操作简便，快速，可作为临床大量体检筛选实验用。