蛋白翻译后修饰检测方法：全面指南

蛋白质的翻译后修饰（Post-translational modifications, PTMs）是细胞中的关键生物化学过程，它会改变蛋白质的化学性质、结构、功能和定位。常见的蛋白后修饰包括磷酸化、乙酰化、泛素化、糖基化、泛酰化等。检测这些修饰对于了解蛋白质的功能和调节机制非常重要。以下是常用的蛋白翻译后修饰检测方法：

1.Western Blot:

使用对特定修饰敏感的抗体来检测特定的蛋白修饰。例如，使用对磷酸化位点特异的抗体来检测蛋白的磷酸化状态。

2.免疫共沉淀 (Co-IP) 和免疫沉淀 (IP):

用于从复杂的细胞裂解物中分离和富集具有特定修饰的蛋白质。

3.质谱分析 (MS):

是当前最强大的用于检测和定量蛋白翻译后修饰的工具。它可以准确地鉴定蛋白的修饰位点和修饰类型。

4.放射性标记:

例如，在磷酸化研究中，可以使用放射性的γ-32P ATP来标记磷酸化的蛋白质。

5.酶联免疫吸附试验 (ELISA):

使用特异性抗体来检测和定量特定的蛋白修饰。

6.荧光共振能量转移 (FRET):

用于在活细胞中实时监测蛋白修饰。

7.免疫荧光显微镜:

可用于在细胞或组织切片中定位特定的蛋白修饰。

8.流式细胞术 (FACS):

可用于检测和定量在细胞表面或细胞内特定的蛋白修饰。