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实验——菌种冷冻干燥保藏法
录入时间:2011-4-13 9:31:53 来源：天津农学院精品课程 1目的 1.1理解冷冻干燥保藏菌种的原理 1.2掌握冷冻干燥保藏菌种的方法。 2 原理 冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保藏的—切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下，因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。 3 材料 3.1 菌株 待保藏的各种菌种。 3.2试剂 2% HCl；牛奶。 3.3器具 安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器。 4 流程 备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化 5步骤 5.1准备安瓿管 安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。将标签放入安培管内，管口塞上棉花，灭菌备用。 5.2制备脱脂乳 用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶，灭菌，并做无菌试验后备用。 5.3制菌悬液 将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内，用接种环将菌种刮下，轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。 5.4分装 用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安培管的装量约为0.9毫升。(一般装入量为安瓿管球部体积的1／3) 5.5预冻 将分装好的安瓿管在-25至-40之间的干冰酒精中进行预冻1小时；或在冰箱冷冻室进行预东。 5.6真空干燥 预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。 5.7封管 封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后，再用火焰熔封，封好后，要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况。如果管内呈现灰蓝色光，证明保持着真空。检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部。 5.8保藏 做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏。 5.9活化 如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，然后将安瓿管上部在火焰上烧热，再滴几滴无菌水，使管子破裂。在用接种针直接挑取松散的干燥样品，在斜面接种。 6结果 6.1简述真空冷冻干燥保藏菌种的原理。 6.2 记录大肠杆菌斜面作液体石蜡封藏和枯草杆菌作沙土管保藏的要点。 7思考 7.1菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？ 7.2经常使用的细菌菌株，使用那种保藏方法比较好？ 7.3沙土管法适合保藏那一类微生物？
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