青春双歧杆菌的实验内容与注意事项及保藏方法！

                                                        青春双歧杆菌是一种益生菌，可治疗慢性腹泻、便秘，还有抗衰老作用。 一、菌种简介 平台编号：Bio-81738 规格：冻干物 拉丁属名：Bifidobacterium Adolescentis 菌种名称：青春双歧杆菌 拉丁文名：Bifidobacterium adolescentis Reuter 培养基编号：62  培养温度：37℃ 培养时间：48 小时 用途：研究；生产  分离源：成人的肠道  相关的培养基详细信息如下： 名称：双歧杆菌培养基 可用于培养菌种：   备注：大豆蛋白胨 5.0克 胰胨 5.0克 酵母提取物 10.0克 葡萄糖 10.0克 盐溶液 40.0ml L-半胱氨酸 0.5克 0.1%刃天青 1.0ml 琼脂 15.0克 蒸馏水 1.0升 pH7.0 盐溶液： 氯化钙 0.2克 七水硫酸镁 0.48克 磷酸氢二钾 1.0克 磷酸二氢钾 1.0克 碳酸氢钠 10.0克 氯化钠 2.0克 蒸馏水 1.0克 pH6.5 用途：研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 保藏条件：斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存,活化好的菌种要放厌氧环境下保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 二、知识背景 青春双歧杆菌是人体益生菌的一种，主要存在于16岁至45岁的人体肠道内。青春双歧杆菌的存在时期，正是人体最青春的时期。足量的青春双歧杆菌，可以有效控制人体肠道内的菌群平衡，它能产生乙酸和乳酸，抑制致病菌的有害发酵，促进肠胃蠕动，使人体正常排便；能够合成出维生素B群、氨基酸，帮助人体消化吸收，并提高钙离子的吸收；能够对外来致病菌产生拮抗作用，使外来致病菌无法定植在肠道内；能够有效分解乳糖，保证人体对乳糖的吸收；能够保护人体细胞免受致癌物质的损害；能够保护人体肝脏和心脑血管；能够提高人体免疫力。正是青春双歧杆菌拥有如此多的作用，才获得了"益生菌之王"的美名。 三、培养基 双歧杆菌培养基 大豆蛋白胨 5.0 克 胰胨 5.0 克 酵母提取物 10.0 克 葡萄糖 10.0 克 盐溶液 40.0ml L-半胱氨酸 0.5 克 0.1%刃天青 1.0ml 琼脂 15.0 克 蒸馏水 1.0 升 pH7.0 其中盐溶液的配制： 氯化钙 0.2 克 七水硫酸镁 0.48 克 磷酸氢二钾 1.0 克 磷酸二氢钾 1.0 克 碳酸氢钠 10.0 克 氯化钠 2.0 克 蒸馏水 1.0 克 pH 6.5 四、实验内容 1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查  2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物  3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查  4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、注意事项 1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3- 0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 个平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；操作完毕尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需要液体培养，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气。 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失； 2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退； 3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理； 4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年； 5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理； 7） 打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 六、保藏方法 1、传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。 2、液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3、载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4、寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5、冷冻保藏法 可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6、冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！ 下载附件