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我打算做蛋白提取,以前单纯用超声效果不好,为了尽量保留活性,选择用溶菌酶见超声破碎的方法。
我按照分子克隆上的步骤:
1.菌体称重为0.4g,加PBS buffer 3ml (PH=8.05),充分混匀。
2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升,至终浓度4mg/ml。冰水浴3小时。
3.超声400w,10s,10s,40次,结果目测还是乳白色,镜检很多菌体。
为什么破不开,搞不懂,我前几天做预实验的时候,还能变澄清???
注:预实验的步骤与现在的一样,只是菌体重量是0.1g加PBS 3ml,再加溶菌酶至1mg/ml,超声400w,10s,10s, 20次。
麻烦大家能给以帮助,先谢谢了...
今天又做了一次,加完溶菌酶之后在4度中半小时,产生了乳白色絮状沉淀,还以为破碎好了呢,但是一超又变混了,1200rpm ,15min 离心之后沉淀发黄,和菌体差不多应该是没破开...????
[ Last edited by humants on 2008-12-6 at 18:45 ] |
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