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SW837人结直肠腺癌上皮细胞的特点及培养操作！
小杨 / 2024-02-16 07:52:10
一、背景 SW837人结直肠腺癌上皮细胞是一种来源于人结肠癌的细胞系，常用于研究结肠癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略。 二、该细胞系具有以下特点 来源：SW837细胞系来源于人结肠癌组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。 形态特征：SW837细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。 生长特性：SW837细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。 侵袭转移特性：SW837细胞具有较强的侵袭和转移能力，可通过Transwell小室实验等方法检测其侵袭和转移能力。 其他特性：SW837细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究结肠癌细胞增殖相关疾病的模型。 三、SW837细胞系培养操作 1)复苏SW837细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)SW837细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)SW837细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 SW837人结直肠腺癌上皮细胞可以用于MST1激活JNK/p53通路抑制线粒体自噬调控直肠癌细胞生长的研究： 本研究旨在探索MST1调控直肠癌细胞生长的机制。研究MST1对直肠癌细胞凋亡、增殖和迁移的影响是否通过干扰线粒体自噬来实现,并进一步探讨MST1影响线粒体自噬的分子机制,为靶向治疗直肠癌提供新策略。 研究方法：体外实验:明确MST1对直肠癌细胞系SW 837生物学行为的影响及可能机制。分三部分。 通过Western blots技术检测直肠癌细胞系SW 837和正常肠粘膜细胞FHC中MST1的表达情况。通过腺病毒转染技术,使SW 837中MST1水平显著上升,建立过表达MST1稳定细胞系。通过MTT法,TUNEL法、BrdU法和Transwell法分析MST1对直肠癌细胞凋亡、增殖和迁移的影响。通过Western blots技术检测凋亡、增殖和迁移相关蛋白的表达水平。 通过JC1染色,mPTP开放实验、Cyt-c免疫荧光以及ATP和ROS水平测定MST1对线粒体功能的影响。通过Western blots技术检测线粒体自噬相关蛋白,并利用线粒体和溶酶体的免疫荧光共染色分析MST1对线粒体自噬的影响。 利用线粒体自噬激活剂FCCP、JNK抑制剂SP600125(SP)和P53siRNA,通过Western blots技术、免疫荧光等方法来探讨MST1与线粒体自噬之间可能的信号通路。 体内实验：验证MST1在体内对裸鼠直肠癌细胞移植瘤生长的影响。将对照组SW 837和过表达MST1的SW 837移植到裸鼠腋部皮下,45天后处死,取出移植瘤,测量移植瘤体积和重量。通过Western blots、qRT-PCR方法检测移植瘤组织中JNK、Caspase 3和Caspase 9的表达情况及Cyclin D和Cyclin E的mRNA水平。同时对移植瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！ 下载附件 上一篇：NRK（大鼠肾细胞）的特点与培养及应用！ 下一篇：皮肤成纤维细胞的培养和计数，你真的会吗？ |
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