一种治疗胃溃疡的生肤油及其制备方法和应用【掌桥专利】

文献发布时间：2024-04-18 19:48:15

技术领域

本发明涉及药物新适应症技术领域，具体涉及一种治疗胃溃疡的生肤油及其制备方法和应用。

背景技术

胃黏膜上皮的完整性、黏膜细胞更新、表皮生长因子、黏液－碳酸氢盐屏障、黏膜血流、前列腺素等因素构成了胃黏膜的防御屏障。一旦幽门螺杆菌感染、应激、药物及其他因素(如暴饮暴食、过度疲劳等)等导致溃疡的攻击因子与保护胃黏膜的防御因子失衡，而胃黏膜在胃酸等攻击下出现破溃，且伤口到达黏膜下层，甚至更深，形成胃壁内侧呈现凹陷状病变的状态，即胃溃疡。其主要的临床体征可见上腹痛、腹胀、恶心、反酸、呕吐等，严重者可引发穿孔和消化道出血，危及患者生命。

胃溃疡是一种常见、易复发且呈世界性分布的疾病。胃溃疡的临床表现虽然以慢性、周期性、节律性、餐后上腹痛为主的典型症状，但是往往会由不同诱因导致发作。再根据不同并发症例如贫血、胃穿孔、胃出血、幽门梗阻等严重的并发症，可分为轻症和重症。临床上针对轻症胃溃疡，一般考虑四联疗法，并在专业医师的指导下使用质子泵抑制剂(奥美拉唑、雷贝拉唑等)加两种抗生素(克拉霉素、阿莫西林、替硝唑、左氧氟沙星等)，以及抑制胃酸的H2受体抑制剂和一种保护胃黏膜的保护剂(果胶铋、次碳酸铋、铝碳酸镁、枸橼酸铋钾等)，持续几周。如果腹痛、贫血等症状较严重，或者溃疡较大，伴有出血等症状，需要绝食数日并进行点滴治疗，并进行止血处理，甚至要输血和铁剂摄入等针对贫血的治疗。一旦确诊有幽门螺杆菌感染，还必须同时进行除菌治疗。遇到有止血困难、胃穿孔等重度急症时，需要手术治疗。短期看来，西药的救治效果非常明显，但长时间服用上述药物后则容易出现抗生素的耐药性，甚至高频率出现不良反应(包括恶心、腹泻、伪膜性肠炎等)，甚至毒副作用，而使得后续治疗难以为继，最终导致病情反复，而迁延难愈。

然而临床上仍旧缺乏一种疗效显著、使用方便、无毒副作用的特效药物。因此，从中医药中寻找治疗胃溃疡的特效药物，成为许多医药学者关注的焦点，也是本发明的主要目的。

本发明的研究内容受到2021年立项的国家自然科学家基金面上项目“基于β-catenin/COX-2炎性环路探究外用生肤油促进糖尿病足病快速修复的效应机制”(2022.1-2025.12)的支撑。

发明内容

针对上述现有技术中缺乏治疗胃溃疡的特效药物的问题：

本发明的第一个目的在于提供一种有效治疗胃溃疡的灌胃生肤油。

本发明的第二个目的在于提供了一种上述治疗胃溃疡的灌胃生肤油的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供了上述治疗胃溃疡的灌胃生肤油的医药用途。本发明的发明构思如下：

人们对胃溃疡的认识由最初的一味地抑制胃酸分泌到重视整个胃黏膜屏障的保护作用，治疗药物也由原来的弱碱类药物调整到现在的质子泵抑制剂以及抗生素的应用。目前采用保护胃黏膜、抑制胃酸分泌为目的的联合疗法，但是仍然受限于化合药物的副作用、高复发率(1年的自然复发率高达60％～80％)等问题，以及抗生素带来的耐药性问题。

在我国传统中医理论中虽无“胃溃疡”的病名，但根据其临床症状，当属于“胃脘痛”、“胃痈”及“吞酸之症”之范畴。其病因病机可分为：①外邪客胃。即外感风、寒、湿、热等邪气致使胃脘痛的发生。《黄帝内经－素问■举痛论》曰：“寒气客于肠胃间，膜原下，血不能散，小络急引，故痛”；②饮食伤胃。则是由于摄取食物不懂节制，过冷、生食或短时间暴增饮食等会致使脾胃不和，即饮食过多，无可化，伤在胃脘；③七情内伤。《脾胃论》曰：“喜、怒、忧、恐，损耗元气。”抑郁恼怒，情志不畅可致肝失疏泄，横逆犯胃，致脾胃气机阻滞不通导致胃脘痛。情志不畅可直接干扰中焦气机，损其内里，致脾胃虚浮而致病；④淤血阻络。主要涉及长期不愈或复发，患者中多存在肝郁气滞血瘀之状，被医者认为本病以虚为本，表象为毒在外，瘀则为病根；⑤脾胃虚弱。现代医家王建华认为，胃溃疡的发病基础就是脾虚，这一观点与古代典籍《脾胃论·脾胃虚实传变论》中提到的脾胃之气无所伤以滋养元气，脾胃伤则元气不充，诸病皆生的观点相统一。

总的来说，胃溃疡初期多起于外感实证，后期则源于脾胃虚弱等虚证，所以其治疗原则多考虑为健脾理气和胃止痛。因此在用药时，常依据辨证分型后治疗。

然而非常遗憾，不管采用西医，或是中医的治疗手段，目前在临床上依旧缺乏一种疗效显著、迅捷，且使用方便、无毒副作用的特效药物。因此，积极寻找治疗胃溃疡，特别是针对不同诱因所致胃溃疡的有效药物，成为许多医药学者关注的重点，也是本发明的主要目的。

本申请人前期研究证实了CN109939182A“一种治疗溃疡性结肠炎的生肤油在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用”中的灌胃生肤油可通过控制溃疡部位炎症反应、保护溃疡创面和维持溃疡部位的组织形态结构，有效治疗轻度和重度溃疡性结肠炎。

虽然，CN109939182A“一种治疗溃疡性结肠炎的生肤油在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用”中的灌胃生肤油中均含有上述能消除胃溃疡病因的五大类药物，有可能改善胃溃疡，但因为给药部位发生了pH值的逆转，发明人必须综合中医学对胃溃疡的辨证和药理学中pH值对药物作用的影响，在原有治疗溃疡性结肠炎的灌胃生肤油之基础上进行加减，形成一个新处方，来模拟在临床上最常见的多种不同因素(如酒精、非甾体抗炎药和环境因素)所致胃溃疡，采用相应胃溃疡的大鼠模型，并在中医分型下采用不同中成药对照(酒精-脾胃湿热型-三九胃泰颗粒；非甾体抗炎药-脾胃虚寒型-小建中颗粒；环境冷刺激-外感实寒型-良附丸)，以灌胃的方式予以给药，探究生肤油是否具有治疗胃溃疡之功效。基于大量的科学实验研究，证实了使用本申请制备的生肤油时，灌胃给药能有效治疗控制胃溃疡部位的粘膜充血水肿，减少出血面积，降低胃排空率，消除炎症反应，快速修复胃溃疡创面，保护胃组织形态结构。换而言之，内服生肤油能够有效改善不同诱因导致的胃溃疡。此外，本申请制备的生肤油用于临床上治疗饮酒导致的胃脘痛，能有效发挥其收敛止血，消肿生肌之功，快速缓解胃粘膜的充血水肿，修复胃溃疡的破溃创面。

为了实现第一个目的，本发明采用了如下技术措施：

一种治疗胃溃疡的灌胃生肤油，由以下重量份配比的原材料制备而成：黄芪30-50重量份、当归30-50重量份、地榆30-50重量份、白芨10-30重量份、乳香10-30重量份、黄芩5-10重量份、黄连5-10重量份、大黄5-10重量份、黄柏5-10重量份、地黄5-10重量份、平卧菊三七5-10重量份、冰片10-15重量份、食用植物油1000-1500重量份；

优选的，一种治疗胃溃疡的灌胃生肤油，由以下重量份配比的原材料制备而成：黄芪50重量份、当归50重量份、地榆50重量份、白芨30重量份、乳香30重量份、黄芩10重量份、黄连10重量份、大黄10重量份、黄柏10重量份、地黄10重量份、平卧菊三七10重量份、冰片15重量份、食用植物油1000-1500重量份；

优选的，一种治疗胃溃疡的灌胃生肤油，由以下重量份配比的原材料制备而成：黄芪30重量份、当归30重量份、地榆30重量份、白芨10重量份、乳香10重量份、黄芩5重量份、黄连5重量份、大黄5重量份、黄柏5重量份、地黄5重量份、平卧菊三七5重量份、冰片10重量份、食用植物油1000-1500重量份；

所述食用植物油选自芝麻油、椰油、花生油、豆油、亚麻油、蓖麻油和橄榄油中的至少一种，优选自芝麻油、椰油和橄榄油中的至少一种。

为了实现第二个目的，本发明采用了如下技术措施：

一种上述治疗胃溃疡的灌胃生肤油的制备方法，其步骤如下：

将食用植物油总量的50％-90％置入容器中，然后向其中加入黄芪、当归、地榆、白芨、黄芩、大黄、黄连、黄柏、地黄、平卧菊三七各药材干粉末，搅拌均匀；静置浸泡3-10日后，在油温为55-65℃下搅拌加热1-2小时后停止加热，向其中加入乳香的干粉末，过滤去渣后，收集滤油；待油温降至30-40℃时，向其中加入冰片和剩余的食用植物油，充分搅匀，冷却，得到治疗胃溃疡的灌胃生肤油。

进一步的，所述食用植物油为重量比为(2-4)：1的芝麻油和椰油，上述制备方法的步骤如下：

将芝麻油置入容器中，然后向其中加入黄芪、当归、地榆、白芨、黄芩、大黄、黄连、黄柏、地黄、平卧菊三七各药材干粉末，搅拌均匀；静置浸泡3-10日后，在油温为55-65℃下搅拌加热1-2小时后停止加热，向其中加入乳香干粉末，过滤去渣后，收集滤油；待油温降至30-40℃时，向其中加入冰片、椰油，充分搅匀，冷却，得到治疗胃溃疡的灌胃生肤油。

进一步，过滤去渣的步骤为：经过闪式提取装置20000rpm高速剪切3-5次后；负压过5000目筛去渣。

进一步，所用黄芪、当归、地榆、白芨、黄芩、大黄、黄连、黄柏、地黄、平卧菊三七和乳香等11味中药材干粉末均为过120目筛。

为了实现本发明的第三个目的，本发明还采用了如下技术措施：

本发明同时也提供了上述灌胃生肤油在制备治疗伤害性刺激所致胃溃疡药物中的应用。

进一步的，所述胃溃疡包括酒精性急性胃溃疡、非甾体抗炎药物性慢性胃溃疡和环境冷刺激性急性胃溃疡。

本发明各中药原料的组方原则如下：

黄芪、当归、地榆、白芨、乳香、冰片等活血化瘀，消肿止痛，为君(为启用补气生肌、活血化瘀的药物，达到改善局部微循环，增强局部抗损伤及修复能力)；黄芩、黄连、黄柏、大黄等解毒祛邪，为臣(为使用抑制胃酸药物、杀灭幽门螺旋杆菌之药物，保护溃疡面不再继续受损，杜绝进一步恶化)；地黄、平卧菊三七等敛阴生肌，祛腐疗疮，消肿排脓，用为佐(协助君臣之药，重新构建胃黏膜的保护屏障)；植物油(利用其用粘性覆盖溃疡面，阻止创面进一步损伤)调和诸药共奏脱毒与生肌之功为使。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：

研究结果表明经灌胃给予本发明制备的生肤油后能有效发挥其制酸、生肌、抗炎、消肿之作用，明显降低溃疡部位的炎症反应，达到了治疗胃溃疡的效果，并且长时间内服用生肤油对各组织器官的形态机构无明显病理性影响。

本发明中的生肤油对防治胃溃疡具有以下优势：①药物成本低，无毒副作用；②经灌胃给药直达溃疡部位，溃疡部位愈合效果佳；③对多种不同因素(如酒精、非甾体抗炎药、环境因素)所致胃溃疡均有良好疗效。

附图说明

图1为实施例3中生肤油治疗酒精性急性胃溃疡的效果图(大体观图、胃排空率分析图和组织HE染色图)。

如图1所示，(1)胃大体观结果。正常组小鼠胃黏膜褶皱排列有序，黏膜颜色呈淡粉色，且整个胃组织未见溃疡、充血、水肿及糜烂；而模型组小鼠胃黏膜褶皱无明显轮廓、排列混乱无序、边缘模糊，胃组织大量充血红肿，伴大量线状、片状出血点，且胃组织中可见大小不一出血点。中药三九胃泰组小鼠的胃黏膜充血水肿，大量线状出血点；西药四联疗法组小鼠胃黏膜呈淡粉色，胃粘膜轻度水肿，且部分线状出血点；生肤油组小鼠胃粘膜呈粉红色，黏膜水肿几乎消失，未见大范围的线状出血点，且出血面积显著下降，出血位置有愈合的趋势；(2)胃溃疡胃排空率分析结果。相对于空白组，模型组小鼠的胃排空率显著升高。相对于中药三九胃泰组和西药四联疗法组，生肤油组小鼠胃排空率明显较低。(3)胃溃疡病理学观察结果。空白组小鼠胃黏膜上皮无明显缺损，连续性好，腺体排列整齐，且黏膜层组织结构层次清楚，无炎性细胞浸润；模型组小鼠胃黏膜损伤累积及黏膜基层，且部分黏膜上皮细胞受损脱落，毛细血管扩张充血，腺体肿胀，结构破坏，炎性细胞浸润明显、深达肌层，其组织病理学评分显著高于空白组；中药三九胃泰组和西药四联疗法组小鼠胃黏膜依旧缺失，结构破坏明显，可见大量炎性细胞浸润，而其组织病理学评分相对于模型组均有改善。

图2为实施例4中生肤油治疗小鼠非甾体抗炎药物性胃溃疡的效果图(大体观图、胃排空率分析图和组织HE染色图)。

如图2所示，(1)胃大体观结果。正常组小鼠胃黏膜褶皱排列有序，黏膜颜色呈淡粉色，且整个胃组织未见溃疡、充血、水肿及糜烂；而模型组小鼠胃黏膜褶皱无明显轮廓、排列混乱无序、边缘模糊，较正常组胃壁更薄、组织有充血水肿，胃组织中可见广泛性的大小不一的白色斑点。相对于模型组，中药小建中组小鼠胃黏膜依旧水肿并伴随不同程度的白色溃疡斑点；西药四联疗法组小鼠部分胃黏膜可见淡粉色、充血水肿程度降低，依旧可见不同程度的白色溃疡斑点；生肤油组小鼠胃黏膜充血水肿几乎消失，黏膜褶皱可见大致轮廓，未发现不同程度上的胃溃疡斑点；(2)胃溃疡胃排空率分析结果。相对于空白组，模型组小鼠的胃排空率显著升高。相对于中药小建中组和西药四联疗法组，生肤油组小鼠胃排空率明显较低，更接近于空白组。(3)胃溃疡病理学观察结果。空白组小鼠胃黏膜上皮无明显缺损，连续性好，腺体排列整齐，黏膜层组织结构层次清楚，无炎性细胞浸润；模型组小鼠胃黏膜全层变薄、损伤累积及黏膜基层，胃黏膜上皮细胞严重减少，黏膜层变薄，部分壁细胞出现空洞，主细胞减少，胃小凹结构较为清晰，黏膜层中可见中性粒细胞、淋巴细胞等炎症浸润，部分可发现胃腺管排列紊乱、减少，浆膜层毛细血管扩张充血，其组织病理学评分显著高于空白组；中药小建中组和西药四联疗法组小鼠胃黏膜层依旧变薄，壁细胞和主细胞依旧异常水肿，结构依旧明显破坏，黏膜层至浆膜层仍然可见大量炎性细胞浸润及血管扩张，但其组织病理学评分相对于模型组均改善较小；生肤油组小鼠胃黏膜形态结构趋于正常，黏膜层缺损较轻，可见正常的上皮细胞，壁细胞和主细胞相对正常，黏膜层至浆膜层炎性细胞浸润较少、细胞水肿减轻、血管扩张减少，而且其病理学评分相对于模型组显著改善。

图3为实施例5中生肤油治疗小鼠环境冷刺激性急性胃溃疡的效果图(大体观图、胃排空率分析图和组织HE染色图)。

如图3所示，(1)胃大体观结果。正常组小鼠胃黏膜褶皱排列有序，黏膜颜色呈淡粉色，整个胃组织未见溃疡、充血、水肿及糜烂；而模型组小鼠胃黏膜褶皱边缘模糊，褶皱间均可见不同程度的点状出血，黏膜水肿严重、色泽暗淡、呈苍白无色无血润状态，各个出血点位置不一，胃溃疡位置呈暗红色至黄色。相对于模型组，中药良附丸组小鼠胃黏膜颜色无苍白表现，黏膜水肿依旧存在，出血部分减少；西药四联疗法组小鼠胃黏膜依旧苍白，出血面积部分减少，可见黏膜部分水肿现象；生肤油组小鼠胃粘膜呈粉红色，黏膜水肿几乎消失，胃黏膜褶皱边缘清晰可见，且出血面积显著下降，出血位置可见有愈合的痕迹；(2)胃溃疡胃排空率分析结果。模型组小鼠的胃排空率显著升高。相对于中药良附丸组和西药四联疗法组，生肤油组小鼠的胃排空率相对较低，与空白组更为接近。(3)胃溃疡病理学观察结果。空白组小鼠胃黏膜上皮无明显缺损，连续性好，腺体排列整齐，且黏膜层组织结构层次清楚，无炎性细胞浸润；模型组小鼠组胃黏膜上皮层脱落，腺体排列杂乱，伴大量红细胞和炎性细胞聚集、深达黏膜肌层，侵蚀了正常细胞，局部大量红染，上皮层可见大量黄色或褐色的坏死的组织，浆膜层水肿严重，结构异常，其组织病理学评分显著高于空白组；中药良附丸组和西药四联疗法组小鼠胃黏膜上皮层依旧可见坏死组织，可见大量炎性细胞浸润，浆膜层水肿消退明显，其组织病理学评分相对于模型组均有改善；生肤油组小鼠胃溃疡周围胃黏膜形态结构趋于正常，炎性细胞浸润显著降低、仅在黏膜层可见，黏膜上皮层脱落细胞显著减少，浆膜层水肿明显改善，且损伤部位见新生肉芽组织，其病理学评分显著改善。

图4为实施例6中长期、大量予以灌胃生肤油对小鼠的肝、肾、小肠等组织结构的影像图图(HE染色图)。

如图4所示，连续15天灌胃给予小鼠生肤油(实施例1制备的生肤油)后，小鼠的小肠组织肠绒毛排列有序，粘膜层、肌层和浆膜组织结构完整；肝组织中肝小叶结构正常、肝索分布规则、组织中并未出现脂肪化现象；肾组织中肾小球形态正常、肾髓质细胞排列有序。

具体实施方式

下面申请人将结合具体的实施例对本发明的技术方案及应用做进一步的详细说明。应理解，以下内容不应以任何方式对本发明的保护范围加以限制。

申请人对生肤油治疗胃溃疡的效果进行了系列、大量的科学实验验证，确认该复方可以有效治疗控制胃溃疡部位的粘膜充血水肿，减少出血面积，降低胃排空率，消除炎症反应，快速修复胃溃疡创面，保护胃组织形态结构。同时，长时间且大量的生肤油灌胃之毒性评估实验表明服用本发明制备的生肤油对正常小鼠肝、肾、小肠等器官无明显损伤影响。

以下实施例中所用黄芪、当归、地榆、白芨、黄芩、大黄、黄连、黄柏、地黄、平卧菊三七和乳香等11味中药材干粉末均为过120目筛。

实施例1：一种生肤油的制备方法，其步骤如下：

将1000g芝麻油置入容器中，然后加入黄芪、当归、地榆的干粉末各50g，白芨的干粉末30g、黄芩、大黄、黄连、黄柏、地黄、平卧菊三七的干粉末各10g，搅拌均匀；静置浸泡10日后，在油温为55℃下搅拌加热2小时。停止加热后，向其中加入乳香干粉末30g，再经过闪式提取装置20000rpm高速剪切5次(每次5min)；负压过5000目筛，收集滤油；待油温降至40℃时，向其中加入冰片15g、500g椰油，充分搅匀，待冷却至室温，装瓶后密闭储存。

实施例2：一种生肤油的制备方法，其步骤如下：

将800g芝麻油置入容器中，然后加入黄芪、当归、地榆的干粉末各30g，白芨的干粉末10g，黄芩、大黄、黄连、黄柏、地黄、平卧菊三七的干粉末各5g，搅拌均匀；静置浸泡3日后，在油温为65℃下搅拌加热1小时。停止加热后，向其中加入乳香干粉末10g，再经过闪式提取装置20000rpm高速剪切3次(每次5min)；负压过5000目筛，收集滤油；待油温降至30℃时，向其中加入冰片10g、200g椰油，充分搅匀，待冷却至室温，装瓶后密闭储存。

实施例3实施例1制备的生肤油对酒精性小鼠急性胃溃疡的治疗效果

受试动物为SPF级别昆明小鼠(18-22g)25只(由湖北省疾病预防控制中心提供)。自由饮水饮食，饲养间室温保持在25±1℃，明暗周期为12小时。1、酒精性小鼠急性胃溃疡模型制备与给药

将小鼠按体重随机区组法均分为5组：正常组(Control)、模型组(Model)、生肤油组(SFO)、三九胃泰组(Sanjiu Weitai，中药组)、雷贝拉唑联合丽珠维三联组(四联疗法组，Quadruple Therapy，西药组)；每组5只。在适应性饲养7天后，对各组进行为期7天的灌胃，正常组和模型组均每天灌胃生理盐水0.1ml/10g，生肤油组每天灌胃生肤油0.1ml/10g，三九胃泰组每天灌胃溶于超纯水的1.154g/mL三九胃泰颗粒(三九胃泰颗粒，华润三九医药股份有限公司)的混悬液0.1ml/10g，雷贝拉唑联合丽珠维三联组每天灌胃溶于超纯水的0.37mg/mL雷贝拉唑(雷贝拉唑钠肠溶胶囊，丽珠集团丽珠制药厂)和40mg/ml丽珠维三联(枸橼酸铋钾片/替硝唑片/克拉霉素片复合包装，丽珠集团丽珠制药厂)的混悬液0.1ml/10g，每组每只每天均灌胃1次。

灌胃周期的第7天，予小鼠禁食24小时和禁水4小时后，对所有造模组小鼠给予无水乙醇0.1ml/10g灌胃，灌胃成功3分钟后小鼠出现全身瘫软、精神紧张、呼吸心跳加速等症状。灌胃后4小时期间予小鼠禁食、禁水，其余饲养条件同前。

2、小鼠胃溃疡部位的大体观察、胃排空率检测及病理染色

给予造模药(无水乙醇)后4小时，处死小鼠，摘取小鼠全胃后，清除胃表面的血迹，第1次称重(胃全重)，沿胃大弯剪开胃组织，用0.9％氯化钠溶液漂洗，用滤纸吸干水分，第2次称重(胃净重)；其计算公式：胃排空率(％)＝(胃全重-胃净重)/胃全重×100％。肉眼观察胃粘膜层溃疡并拍照记录，并使用游标卡尺测量溃疡条纹的长度和宽度。同时使用如表1所示的胃溃疡对小鼠胃组织进行胃溃疡评分。之后用10倍标本体积的10％福尔马林固定小鼠胃组织，脱水包埋后进行4μm厚连续切片，HE染色并在显微镜下观察其组织结构变化，再使用如表2的胃溃疡病理评分对小鼠胃组织进行病理学评分。

3、实验结果

1)酒精性胃溃疡大体观观察

如图1A、图1B和图1C所示，正常组小鼠胃黏膜褶皱排列有序，黏膜颜色呈淡粉色，整个胃组织未见溃疡、充血、水肿及糜烂(胃溃疡评分为0±0；胃溃疡面积为0.04±0.02mm

2)酒精性胃溃疡胃排空率分析

如图1D所示，模型组小鼠胃排空率(0.63±0.02)相对于空白组(0.37±0.06)显著升高，这说明酒精性胃溃疡小鼠发生胃溃疡后存在胃动力异常、胃中内容物不能正常排出、胃部压力过高。而生肤油组小鼠胃排空率(0.45±0.02，p0.05)和西药四联疗法组(0.50±0.05，p>0.05)与空白组更接近，因此生肤油能够在酒精性胃溃疡发生后缓解胃动力异常、正常排出胃部内容物和降低胃部压力。

3)酒精性胃溃疡病理学观察

如图1E和图1F所示，空白组小鼠胃黏膜上皮无明显缺损，连续性好，腺体排列整齐，黏膜层组织结构层次清楚，无炎性细胞浸润；模型组小鼠胃黏膜损伤累积及黏膜基层，可见部分黏膜上皮细胞受损脱落，毛细血管扩张充血，腺体肿胀，结构破坏，炎性细胞浸润明显、深达肌层，组织病理学评分(9.20±0.37)显著高于空白组(0±0)；中药三九胃泰组和西药四联疗法组小鼠胃黏膜依旧缺失，结构破坏明显，可见大量炎性细胞浸润，其组织病理学评分三九胃泰组(7.20±0.37，p

实施例4实施例2制备的生肤油对非甾体抗炎药物性小鼠慢性胃溃疡的治疗效果

受试动物为SPF级别昆明小鼠(18-22g)25只(由湖北省疾病预防控制中心提供)。自由饮水饮食，饲养间室温保持在25±1℃，明暗周期为12小时。1、非甾体抗炎药物性小鼠慢性胃溃疡模型制备与给药

将小鼠按体重随机区组法均分为5组：正常组(Control)、模型组(Model)、生肤油组(SFO)、小建中组(Xiaojianzhong，中药组)、雷贝拉唑联合丽珠维三联组(四联疗法组，Quadruple Therapy，西药组)；每组5只。在适应性饲养7天后，小鼠连续灌胃10天，正常组和模型组均每天灌胃生理盐水0.1ml/10g，生肤油组每天灌胃生肤油0.1ml/10g，小建中组每天灌胃溶于超纯水的0.585g/mL小建中颗粒(小建中颗粒，湖南康尔佳制药股份有限公司)的混悬液0.1ml/10g，雷贝拉挫联合丽珠维三联组每天灌胃溶于超纯水的0.37mg/mL雷贝拉唑(雷贝拉唑钠肠溶胶囊，丽珠集团丽珠制药厂)和40mg/ml丽珠维三联(枸橼酸铋钾片/替硝唑片/克拉霉素片复合包装，丽珠集团丽珠制药厂)的混悬液0.1ml/10g，每组每只每天均灌胃1次。在灌胃的第5天后，除空白组外小鼠在灌胃药物之后2小时额外灌胃溶于超纯水的20mg/mL阿司匹林的混悬液0.1ml/10g，连续灌胃5天。

2、小鼠胃溃疡部位的大体观察、胃排空率检测及病理染色

连续灌胃10天后，处死小鼠，摘取小鼠全胃后，清除胃表面的血迹，第1次称重(胃全重)，沿胃大弯剪开胃组织，用0.9％氯化钠溶液漂洗，用滤纸吸干水分，第2次称重(胃净重)；其计算公式：胃排空率(％)＝(胃全重-胃净重)/胃全重×100％。肉眼观察胃粘膜层溃疡的表征并拍照记录，并使用游标卡尺测量溃疡条纹的长度和宽度。同时使用如表1所示的胃溃疡对小鼠胃组织进行胃溃疡评分。之后用10倍标本体积的10％福尔马林固定小鼠胃组织，脱水包埋后进行4μm厚连续切片，HE染色并在显微镜下观察其组织结构变化，再使用如表2的胃溃疡病理评分对小鼠胃组织进行病理学评分。

3、实验结果

1)非甾体抗炎药物性胃溃疡大体观观察

如图2A、图2B和图2C所示，正常组小鼠胃黏膜褶皱排列有序，黏膜颜色呈淡粉色，整个胃组织未见溃疡、充血、水肿及糜烂(胃溃疡评分为0±0；胃溃疡面积为0.20±0.02mm

2)非甾体抗炎药物性胃溃疡胃排空率分析

如图2D所示，模型组小鼠胃排空率(0.58±0.04)相对于空白组(0.42±0.07)显著升高，这说明非甾体抗炎药物性胃溃疡小鼠发生胃溃疡后存在胃动力异常、胃中内容物不能正常排出、胃部压力过高。而生肤油组小鼠胃排空率(0.44±0.05，p0.05)和西药四联疗法组(0.45±0.05，p>0.05)与空白组更接近，因此生肤油能够在非甾体抗炎药物性胃溃疡发生后缓解胃动力异常、正常排出胃部内容物和降低胃部压力。

3)非甾体抗炎药物性胃溃疡病理学观察

如图2E和图2F所示，空白组小鼠胃黏膜上皮无明显缺损，连续性好，腺体排列整齐，黏膜层组织结构层次清楚，无炎性细胞浸润；模型组小鼠胃黏膜全层变薄、损伤累积及黏膜基层，胃黏膜上皮细胞严重减少，黏膜层变薄，部分壁细胞出现空洞，主细胞减少，胃小凹结构较为清晰，黏膜层中可见中性粒细胞、淋巴细胞等炎症浸润，部分可发现胃腺管排列紊乱、减少，浆膜层毛细血管扩张充血，组织病理学评分(7.60±0.50)显著高于空白组(0±0)；中药小建中组和西药四联疗法组小鼠胃黏膜层依旧变薄，壁细胞和主细胞依旧异常水肿，结构依旧明显破坏，黏膜层至浆膜层仍然可见大量炎性细胞浸润及血管扩张，其组织病理学评分小建中组(6.60±0.40，p>0.05)和四联疗法组(6.00±0.31，p

实施例5实施例1制备的生肤油对环境冷刺激性小鼠急性胃溃疡的治疗效果

正常雄性昆明小鼠(18-22g)(由湖北省疾病预防控制中心提供)。自由饮水饮食，饲养间室温保持在25±1℃，明暗周期为12小时。

1、环境冷刺激性小鼠急性胃溃疡模型制备与给药

将小鼠按体重随机区组法均分为5组：正常组(Control)、模型组(Model)、生肤油组(SFO)、良附丸组(Liangfu Pill，中药组)、雷贝拉挫联合丽珠维三联组(四联疗法组，Quadruple Therapy，西药组)；每组6只。在适应性饲养7天后，对各组进行为期7天的灌胃，正常组和模型组均每天灌胃生理盐水0.1ml/10g，生肤油组每天灌胃生肤油0.1ml/10g，良附丸组每天灌胃溶于超纯水的0.4g/mL良附丸(良附丸，北京同仁堂制药有限公司)的混悬液0.1ml/10g，雷贝拉唑联合丽珠维三联组每天灌胃溶于超纯水的0.37mg/mL雷贝拉唑(雷贝拉唑钠肠溶胶囊，丽珠集团丽珠制药厂)和40mg/ml丽珠维三联(枸橼酸铋钾片/替硝唑片/克拉霉素片复合包装，丽珠集团丽珠制药厂)的混悬液0.1ml/10g，每组每只每天均灌胃1次。

灌胃7天后予小鼠禁食24小时，禁水4小时。待小鼠放入简易小鼠冷束缚装置(一种改良的EP管)后，竖直立于水温稳定在20℃的水浴锅中，小鼠通气口向上，保持小鼠的剑突部位平齐于水平面。水浸没冷束缚应激持续8小时后，终止实验，将小鼠从冷束缚装置中取出，放置在实验台上，过程中注意保持小鼠呼吸道通畅，再将小鼠毛发吹干。

2、小鼠胃溃疡部位的大体观察、胃排空率检测及病理染色

在冷束缚实验结束后，处死小鼠，摘取小鼠全胃后，清除胃表面的血迹，第1次称重(胃全重)，沿胃大弯剪开胃组织，用0.9％氯化钠溶液漂洗，用滤纸吸干水分，第2次称重(胃净重)；其计算公式：胃排空率(％)＝(胃全重-胃净重)/胃全重×100％。肉眼观察胃粘膜层溃疡的表征并拍照记录，并使用游标卡尺测量溃疡条纹的长度和宽度。同时使用如表1所示的胃溃疡对小鼠胃组织进行胃溃疡评分。之后用10倍标本体积的10％福尔马林固定小鼠胃组织，脱水包埋后进行4μm厚连续切片，HE染色并在显微镜下观察其组织结构变化，再使用如表2的胃溃疡病理评分对小鼠胃组织进行病理学评分。

3、实验结果

1)环境冷刺激性胃溃疡大体观观察

如图3A、图3B和图3C所示，正常组小鼠胃黏膜褶皱排列有序，黏膜颜色呈淡粉色，整个胃组织未见溃疡、充血、水肿及糜烂(胃溃疡评分为0±0；胃溃疡面积为0.20±0.20mm

2)环境冷刺激性胃溃疡胃排空率分析

如图3D所示，模型组小鼠胃排空率(0.58±0.04)相对于空白组(0.42±0.07)显著升高。这说明环境冷刺激性胃溃疡小鼠发生胃溃疡后存在胃动力异常、胃中内容物不能正常排出、胃部压力过高。而生肤油组小鼠胃排空率(0.44±0.05；p0.05)和西药四联疗法组(0.45±0.05；p>0.05)与空白组更接近，因此生肤油能够在环境冷刺激性胃溃疡发生后缓解胃动力异常、正常排出胃部内容物和降低胃部压力。

3)环境冷刺激性胃溃疡病理学观察

如图3E和图3F所示，空白组小鼠胃黏膜上皮无明显缺损，连续性好，腺体排列整齐，黏膜层组织结构层次清楚，无炎性细胞浸润；模型组小鼠组胃黏膜上皮层脱落，腺体排列杂乱，大量的红细胞和炎性细胞聚集、深达黏膜肌层，侵蚀了正常细胞，局部大量红染，上皮层可见大量黄色或褐色的坏死的组织，浆膜层水肿严重，结构异常，组织病理学评分(8.00±0.44)显著高于空白组(0±0)；中药良附丸组和西药四联疗法组小鼠胃黏膜上皮层依旧可见坏死组织，可见大量炎性细胞浸润，浆膜层水肿消退明显，其组织病理学评分良附丸组(6.40±0.50；p

表1

表2

实施例6长期、大量的生肤油灌胃对健康小鼠的肝、肾、小肠组织结构的影响1、生肤油灌胃后健康小鼠的肝、肾、小肠组织结构指标的测定

取10只六周龄实验雄鼠(体重为18-20g)，均分为生肤油组(实施例1制备的生肤油)和空白组(予以等量生理盐水)；每组5只。在连续灌胃给予小鼠生肤油(0.5mL/20g体重；每天1次)15天后，麻醉处死，取各组小鼠的肝、肾、小肠之组织进行HE染色，并进行结构评估。

2、实验结果

如图4所示，连续15天灌胃给予小鼠生肤油后，小鼠的小肠组织肠绒毛排列有序，粘膜层、肌层和浆膜组织结构完整；肝组织中肝小叶结构正常、肝索分布规则、组织中并未出现脂肪化现象；肾组织中肾小球形态正常、肾髓质细胞排列有序。换而言之，经组织结构的病理学评估，与正常组相比，灌胃给予生肤油后，其无论是对小鼠的肝，还是对其肾和小肠，各脏器的组织结构均无异常。