酵母细胞形态观察

【实验目的】

掌握酵母制片方法，观察酵母的个体形态、生殖方式及菌落形态；了解反差在染色中的作用。

【实验原理】

酵母是单细胞的真核微生物，不能进行光合作用，细胞壁为三明治结构，主要由葡聚糖组成。有无性或有性生殖方式。酵母形态简单，圆形、椭圆形或圆柱型，细胞核较小，老细胞有较明显的液泡。主要分布在偏酸性环境中，利用糖类为碳源。不同于其他微生物，酵母的菌落颜色较单调，一般是乳白色，少数是红色。

酵母不同于霉菌，一般不能形成分枝繁茂的菌丝。酵母主要通过出芽进行繁殖，这也是主要的无性繁殖方式，但有些酵母在一定培养条件下出芽生殖时，子细胞尚未脱离母体，它们又可进一步出芽繁殖，形成细胞串，与菌丝形态类似，但这样的细胞串并非真正的菌丝，被称为“假菌丝”。酵母是常见的最简单真核生物，形态简单，没有太多形态分化与发育，因此能形成假菌丝是某些酵母的重要形态特征，具有重要的分类学依据。

美蓝染液应用于死活染色，它的毒性低；染液不能进入活细胞；且氧化态与还原态颜色不同，可用于厌氧指示剂。

【实验步骤】

1.记录并绘制酿酒酵母、热带假丝酵母、红酵母的个体形态及生殖方式。

水浸片法：在载玻片中央滴一滴蒸馏水，取酵母少许，放在水滴中，使菌体与水混匀，盖上盖玻片后镜检。可以适当将光圈缩小观察。

2.记录酿酒酵母、热带假丝酵母、红酵母的菌落特征。

3.酿酒酵母的死活染色：

1)在载玻片中央加一滴碱性美蓝染液，然后按无菌操作法取斜面上培养2-3d的酿酒酵母少许，放在碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

2)取盖玻片一块，小心地盖在液滴上。

3)将制好的片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用髙倍镜观察酿酒酵母的形态和岀芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

【实验结果】

在40倍镜下对酿酒酵母、热带假丝酵母、红酵母镜检，蓝色为美蓝染液死活染色，白色为不染色直接观察。

手绘图：

酿酒酵母、热带假丝酵母、红酵母菌落观察：

【讨论】

观察假菌丝时用水浸片法，蘸取少量培养物，不要涂片以防破坏菌丝结构。

液加蒸馏水或美蓝染液时不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢岀或留有气泡。

盖盖玻片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。