细胞学堂

传了1代后，细胞形态开始发生改变，细胞伸出丝状伪足，形态似成纤维细胞（如图2)。

图2. 第2代细胞状态图（图片来源于客户，仅供参考）

从第1代到第2代，细胞就发生了形态上的改变。那么，继续传代下去，细胞形态是否会继续发生改变呢？

答案是肯定的。第3代的软骨细胞形态成纤维化会更为明显，细胞形态出现长梭形，并且生长速度开始下降。4代后较为明显，到第6代细胞形态几乎全部变为长梭形，似成纤维细胞样。所以，建议最好选择2代或3代的软骨细胞进行实验。

既然人软骨细胞传代时，形态会发生变化，那究竟是什么原因造成的呢？

在体外培养人软骨细胞时，软骨细胞呈贴壁生长，原代细胞大多呈椭圆形和多角形。随着传代次数增加，细胞逐渐变成长梭形，向纤维样细胞转化。同时，该细胞的功能也会发生变化：软骨标志性蛋白Ⅱ胶原合成分泌减少，而Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分泌增多。

Ⅱ胶原的合成和分泌，是软骨细胞维持其分化表型的特征性指标，其在透明软骨中占胶原的85%~90%，提供了软骨特有的张力和硬度。

其次，软骨中的其他分子与胶原蛋白结合，会形成网状结构，使软骨具有一定的弹性，同时对于维持软骨形状，承载外来负荷起着非常重要的作用。所以，随着传代次数的增加，维持细胞形态的物质会逐渐减少，细胞的形态就会发生改变。

这种形态和功能的变化称之为反分化现象，也是单层传代细胞的普遍现象。

培养小贴士：

1. 低密度培养的软骨细胞易发生去分化现象，一般最适接种密度为2~10×104/cm2;

2. 软骨细胞代谢较为缓慢，换液频度的增加无益于细胞的增殖，反而可能破坏由细胞分泌而形成的群体化学环境。

●参考文献●

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