PCR Mix

产品组分

注： 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。 保存条件    -20℃保存2年。    请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。 产品说明    PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染(加样次数减少)同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。    Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min(70-75 ℃)。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。 产品特点    使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。    快速、高效：减少加样步骤，节约时间。    可重复：降低污染和加样错误风险 产品用途    高通量PCR检测。    高重复性PCR检测。    制备TA克隆用的PCR产物。 活性定义    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。 质量控制    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。 2×PCR Mix(前名Taq Mix)的组分  100 mM KCl  20 mM Tris-Cl  3 mM MgCl2  0.4 mM dNTP混合物  0.1 U/μlTaq DNA聚合酶  溴酚蓝等 应用举例注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定较佳反应条件。(Taq Mix即PCR Mix) 以λDNA为模板，扩增1kb片段。

 反应条件

备注：    1  建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。    2  模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

 Q&A问：PCR Mix的反应体系与普通Taq DNA聚合酶的反应体系有何不同？答：PCR Mix的反应体系中除Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Mg2+等常规组分外，还包含适当比例的PCR Enhancer与稳定剂。而且，反应体系中的离子种类与浓度也有所区别。 问：为什么PCR Mix的灵敏度与扩增效率会高于普通Taq DNA聚合酶？答：这是由于东盛对PCR Mix反应缓冲液中的成分与浓度进行了优化。我们在TaqMix反应缓冲液中添加了适当比例的PCR Enhancer，提高了聚合酶的热稳定性，显著降低DNA二级结构对于PCR扩增的影响。同时，对PCR Mix反应缓冲液中的离子浓度与比例进行优化，使得聚合酶处于最适活性状态，从而获得了较佳的扩增效率。 问：为什么PCR Mix的重复性更好？答：这是由于PCR Mix是规模化工业生产，PCR体系组分的浓度与比例一致性好，且减少多种溶液被PCR模板污染的可能性，以及在加样过程中人为造成的误差，大大提高了实验的重复性，特别适合高通量与高重复性PCR检测。问：PCR Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆？答：可以直接进行TA克隆。