干货丨液相色谱常见问题及处理方法

1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

HPLC仪器问题

1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？

答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。

2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？

答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气

b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物

c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封

d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修

f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器

g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处

h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

3、接头处为何经常漏液，如何处理？

答：接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。接头被污染或磨损；建议更换接头。接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。

4、进样阀漏液是如何造成的？

答：a.转子密封损坏；更换转子密封

b.定量环阻塞；清洗或更换定量环

c.进样口密封松动；调整松紧度

d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状）

e.废液管中产生虹吸；清空废液管

谱图问题

1、问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？

答：a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板

b.色谱柱塌陷；填充色谱柱

c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱

e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱

2、问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？

答：保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。

3、问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？

答：反相模式，二级保留效应；a.加入三乙胺（或碱性样品）b.加入乙酸（或酸性样品） c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品）

d.更换一支柱子

4、问：保留时间的波动有几种可能的原因？

答：温控不当；调节好柱温。流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

（来源：互联网）

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