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判断方法 降低该成分在样品中的浓度 b图是降低该成分浓度后, 进样后得到的色谱图。
那肩峰也应该响应变小, 但是这个例子里, 肩峰没有变小, 这应该是另外一个化合物。 这时候,我们就要考虑如何改变方法 将这两个东西分开。 如果所有峰的峰形都不好 一般来说, 一个样品都会出多个峰。 峰形不好,绝大多数时候 在每个峰上面都会出现。 比如像下面这样:
b图是所有峰都有肩峰, 也可以说峰分叉, 这种情况一般都是色谱柱头塌陷 或者柱头的筛板被堵导致的。 为什么会导致峰形问题呢? 请看下面的图 a图是正常的柱头, b图是筛板被堵的柱头。 正常情况下, 所有样品分子都是均匀通过色谱柱, 形成一个对称的峰形。 堵塞的情况下, 有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰, 导致时间拖后,形成拖尾。 对于色谱柱塌陷的情况, 用同样的方法大家也不难理解。 只不过这时候, 是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些。 如何解决这个问题呢? 1 反冲 柱出口放空, 冲20-30ml流动相。 虽然柱子上都有表明使用方向, 但是对于硅胶基质的色谱柱 基本都可以反冲。 将柱头污染物 如泵密封圈的碎屑, 样品中的污染等冲走, 就能解决问题。 当然,还是要提倡大家注意 样品上机之前的前处理 和及时更换磨损的泵密封圈。 有条件的还是用保护柱, 大不了就换保护柱, 也比换色谱柱强。 2 更换或清洗筛板 现在估计做这个事情的人不多, 但是谁有废柱子, 想练练也未尝不可。 我们一起看看一个实际的例子 根据之前说的, 可能是柱头堵了, 或者塌陷了。 但是进一步检查, 发现另有原因。 方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子, 78% 乙腈,1.5ml/min,等度方法, 进样10ul,100%乙腈溶解的样品。 一般来说, 虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好, 但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时, 的确会引起峰形的问题。 我们怎么办呢? 01 从最容易的办法做起, 降低溶剂乙腈的比例, 降到50%看看。 从下图b,4min的峰可以看出, 没啥改观。 02 接下来反冲柱子, 结果如图c, 基本没变化。 算了,明天再说吧。 03 第二天来到实验室, 还能干嘛呢? 更换筛板? 算了,直接换柱子吧! 结果如d,
之前柱子肯定有问题,扔了。 但是峰还是有点宽, 估计还是哪儿有问题。 手上忙,没时间管这个。 04 几天过后, 重新配了流动相, 一跑,好了,如图e。 虽然到底什么原因导致之前峰形的问题, 已经无从查找 (柱子扔了,旧流动相也没了), 但是也给我们提供了一个解决问题的步骤: 1 确定峰形问题 是所有峰都有问题, 还是就是某一个峰有问题。 如果所有峰都有问题, 基本都是色谱柱, 或者仪器管路连接的问题。 如果是某一个峰有问题, 那就要从方法上来考虑, 是否需要改变流动相比例, pH值,色谱柱温度等等。 2 从最简单的做起 从不需要换什么东西的方法做起。 比如改变样品溶剂, 反冲色谱柱等等。 3 换东西 换保护柱,换色谱柱, 换流动相(新配), 一步一步的换, 有助于找到问题的根本。 4 总结经验 问题解决后, 想想需不需要采取什么措施, 防止类似问题的发生, 比如说常换流动相啦, 及时更换密封圈啦, 记录进样次数 了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的。 希望以上信息能够让各位同学 在碰到峰形不好的问题时, 有一些思路, 不至于手足无措。 也欢迎大家留言补充 上面没有提到的可能影响峰形的可能。 更多检测标准解读 专家培训课程 技术经验干货分享 VX关注公众号:安谱实验学堂返回搜狐,查看更多 |
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