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一、目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点 二、原理 水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合,形成—NH—CH 2 OH、—N(CH 2 —OH) 2 等羟甲基衍生物,使N+H3上的H+游离出来,这样就可以用碱滴定N+H3放出H + ,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量。 若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。 若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液),测不能由此法算出氨基酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后,生成的化合物不稳定,导致滴定后结果偏低;酪氨酸含酚基结构,导致滴定结果偏高。三、材料、 试剂 与器具 (一) 试剂 1、0.5%酚酞酒精溶液 称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。 2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液 取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。 3、1%甘氨酸溶液 取1g甘氨酸溶于100ml 蒸馏 水。 4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液 5、中性甲本醛溶液 取甲醛溶液50ml,加0.5%酚酞指示剂约3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉红色,临用前中和。 (二)实验器具 1、锥形瓶 2、碱式滴定管 3、 移液管洗耳球 4、天平 5、容量瓶 6、试剂瓶 7、量筒 8、玻棒与烧杯 四、操作步骤 1、取3只100ml锥形瓶,按下表加入试剂。2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色(pH8.7~9.0) 3、结果计算 每毫升 氨基酸 溶液中含氨基氮的毫克数为五、注意事项 利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加,滴定值也增加,当蛋白质水解完成后,滴定值不再增加。 |
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