毒理学杂志

目的 初步探讨全氟辛基磺酸钾(PFOS-K)对环青春期雌性大鼠的毒性.方法 根据环青春期雌性大鼠青春期发育和甲状腺功能试验,PFOS-K喂饲给予,其在饲料中浓度分别为0、2、6和18mg/kg·bw,连续染毒21d.结果 与对照组相比,18mg/kg·bw组体重明显下降;6和18mg/kg·bw组肝脏体比增加,肝细胞肿大,18mg/kg·bw组谷丙转氨酶、白蛋白、碱性磷酸酶和总胆汁酸浓度均明显升高,各剂量组胆碱酯酶和甘油三酯浓度显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量-反应关系;与对照组相比,各剂量组网织红细胞、红细胞和血红蛋白浓度下降,差异有统计学意义(P＜0.05);18mg/kg·bw组青春发育延迟,垂体和附属性器官脏体系数降低,子宫内膜和肌层变薄,甲状腺滤泡上皮细胞增厚,滤泡面积减小;18mg/kg·bw组肾脏体比降低,尿素氮升高;18mg/kg·bw组脾脏体比降低,6和18mg/kg·bw组中性粒细胞明显增加,单核细胞比率降低,上述差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PFOS-K对环青春期雌性大鼠有肝毒性、骨髓毒性、内分泌干扰作用(抗雌激素和甲状腺干扰作用)、肾毒性和免疫毒性;小可见损害作用水平(LOAEL)为2.39mg/kg·bw.

目的 研究琐琐葡萄多糖抗大鼠肝纤维化作用.方法 60只大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、模型组、VVP低剂量组(125mg/kg·bw)、VVP中剂量组(250mg/kg·bw)和VVP高剂量组(500mg/kg·bw),10只/组;空白对照组不施加任何处理,模型组和VVP各剂量组皮下注射40％四氯化碳(CCl4)首次0.8ml/l00g·bw,以后0.5ml/l00g·bw,溶剂对照组皮下注射等剂量花生油,每周2次;VVP干预组每天按照设定剂量灌胃给予VVP溶液,模型组和溶剂对照组灌胃等体积蒸馏水,灌胃体积均为10ml/kg·bw,试验周期为8周;实验结束时,所有动物隔夜禁食,腹主动脉采血,取肝、肾、脾和胸腺,分别测定脏器系数、生化指标,并对肝病理组织学变化进行检查.结果 琐琐葡萄多糖明显增强肝纤维化大鼠体重,降低肝纤维化大鼠的肝脏和脾脏指数,提高胸腺指数;并能显著降低肝损伤大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、转化生长因子-β1(TGF-βl)和透明质酸(HA)水平;与模型组比较,VVP有效改善肝组织病理损伤.结论 琐琐葡萄多糖可有效抑制CCl4所致大鼠肝纤维化,机制可能与降低TGF-β1水平有关.

目的 研究β淀粉样蛋白(Aβ25-35)对SD大鼠海马神经细胞内质网应激(ERS)的影响及其机制研究.方法 60只雄性SD大鼠随机分为6组,分别为高剂量组(7.5μg/μl)、中剂量组(5μg/μl)、低剂量组(2.5μg/μl)、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只.通过立体定位仪向大鼠两侧海马位置分别注射Aβ25-35 2μl制造AD模型,在光学显微镜和电子显微镜下观察内质网形态,Western blot、RT-PCR检测GRP78、ATF-6、IRE-1和PERK的表达变化.结果 Aβ25-35可损害海马神经细胞,表现为细胞排列紊乱疏松、细胞肿大有空泡、少数细胞出现核偏位和核固缩.Aβ25-35可以损害内质网形态,导致海马细胞内质网肿胀肥大,扩张明显,内质网管膜破裂等.与空白对照组比较,GRP78、ATF-6、IRE-1和PERK的mRNA及蛋白的表达水平均增高,除低剂量组PERK mRNA之外其他各剂量组上述指标与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Aβ25-35可导致大鼠海马神经产生ERS,启动UPR的凋亡信号通路.

目的 观察不同浓度胺碘酮对小鼠肺成纤维细胞增殖及表面活性蛋白D(SP-D)表达的影响.方法 取生长状态良好的3～5代小鼠肺成纤维细胞,用10％小牛血清培养制成细胞悬液加入96孔板中培养.分别给予不同浓度(0.5、1.0、2.0和4.0μmoL/L)胺碘酮处理,于给药12、24和48h后采用MTT法检测细胞增殖;蛋白免疫印迹法检测SP-D蛋白的表达.结果 0.5～4.0μmol/L胺碘酮作用于肺成纤维细胞12、24和48h后对细胞增殖有明显促进作用,且增殖率与浓度和时间成正相关(r=0.834,r=0.881,P＜0.05).与对照组相比,胺碘酮能明显增加细胞SP-D蛋白的表达(P＜0.05).胺碘酮A～D组细胞SP-D、a-SMA、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达高于对照组细胞(P＜0.05),胺碘酮A～D组细胞SP-D、a-SMA、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达水平随胺碘酮浓度增加升高(F=10.215,P＜0.01),细胞SP-D、a-SMA、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达量与胺碘酮的浓度呈正相关(r=0.786,P＜0.01).结论 胺碘酮可刺激小鼠肺成纤维细胞增殖,并且增加肺成纤维细胞SP-D蛋白的表达.

目的 探讨氧化苦参碱对内毒素诱导心肌细胞凋亡的干预作用.方法 实验分为3组:对照组、内毒素(LPS)处理组和氧化苦参碱(OMT 80μg/ml)+内毒素(LPS)处理组.MTT试剂检测细胞存活率;流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡;RT-PCR检测各组心肌细胞MAPK和ERK5 mRNA的表达;Western blot检测各组心肌细胞内MAPK和ERK5的蛋白表达.结果 OMT进行不同剂量干预后,内毒素诱导心肌细胞存活率明显上升,OMT剂量40μg/ml时,细胞存活率明显高于LPS组(P＜0.05),OMT剂量80μg/ml时,细胞存活率明显高于LPS组(P＜0.01).OMT 80μg/ml干预后,UR、LR区的细胞比例较LPS组下降(P＜0.05).OMT 80μg/ml干预后,能明显逆转内毒素诱导的心肌细胞内MAPK、ERK5 mRNA的表达(P＜0.05),同时,内毒素诱导心肌细胞内MAPK、ERK5蛋白的表达也得到明显逆转(P＜0.05),上述差异均有统计学意义.结论 OMT 80μg/ml抑制内毒素诱导的心肌细胞的凋亡可能是通过影响心肌细胞内MAPK/ERK5信号通路来实现的.

目的 探讨干扰素-β(INF-β)对SiO2诱导THP-1、A549和BEAS-2B细胞内细胞因子及纤维化基因变化的影响.方法 将二氧化硅(SiO2)分别与无血清的THP-1、A549和BEAS-2B细胞温育4h,之后用含有血清INF-β加SiO2悬液培养上述3种细胞72h后,采用荧光定量PCR方法测定对照组、SiO2和INF-β+ SiO2组内细胞因子和纤维化相关基因IL-8(A)、TNF-β(B)、COLⅠ(C)和COLⅢ(D)的mRNA表达水平.结果 SiO2作用上述3种细胞后,细胞因子和纤维化相关基因IL-8(A)、TNF-β(B)、COLⅠ(C)和COLⅢ(D)的mRNA表达水平与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);经INF-β+SiO2作用上述3种细胞后,细胞因子和纤维化相关基因IL-8(A)、TNF-β(B)、COLⅠ(C)和COLⅢ(D)的mRNA表达水平与SiO2组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 SiO2可提高THP-1、A549和BEAS-2B细胞因子IL-8及TNF-β基因mRNA表达水平,主要对THP-1细胞内IL-8 mRNA的诱导效果为强,INF-β对于IL-8及TNF-β的基因mRNA表达具有降低作用,然而INF-β抑制COLⅠ及COLⅢ的基因mRNA表达,说明INF-β对SiO2诱导人呼吸道细胞内纤维化相关基因表达具有抑制作用,可能与矽肺发病及防治机制具有一定关系.

目的 探索不同浓度钒化钠对食管癌细胞系EC109的抑增殖和促凋亡作用.方法 体外培养食管癌细胞系EC109,给予0、0.1、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0和200.0μmol/L钒化钠处理,分别培养15、30min、1、2和4h后,通过Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1与细胞凋亡蛋白Caspase-3在不同时间、不同浓度的表达变化.给予以上相同浓度的钒化钠分别处理细胞4、12、24和48h后,MTT法与流式细胞术检测不同时间、不同浓度的钒化钠对食管癌细胞系EC109细胞株的增殖与周期影响.结果 蛋白印迹结果显示,在100～200μmol/L的浓度范围内随着钒化钠药物浓度的增加,药物处理时间的延长,Cyclin D1的表达呈现逐渐下降的趋势(P＜0.05);当钒化钠浓度小于10μmol/L时,Caspase-3的表达变化无统计学意义(P＞0.05),当处理浓度达到50μmol/L或者更高以及处理时间达到30min甚至更长时,Caspase-3的蛋白表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT法结果显示,钒化钠浓度达到50～200μmoL/L时,EC109细胞的增值受到抑制(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,当钒化钠浓度为50～200μmol/L时,随着处理时间24和48h时的增加,EC109细胞被阻滞在S期,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109的生长,表现出一定的抗肿瘤作用,为钒化钠成为食管癌的临床治疗药物提供实验依据.

目的 旨在评价不同剂量地佐辛下进行BMSC移植术,对局麻药布比卡因所致大鼠脊髓组织损伤、创伤痛的镇痛效果及对移植术疗效的影响.方法 布比卡因腰部穿刺注射建立脊髓组织损伤大鼠,并分为模型组、低剂量组和高剂量组.选择健康大鼠设为对照组,低剂量组和高剂量组大鼠进行BMSC移植术前分别接受地佐辛0.1和0.5mg/100g·bw麻醉.术后分别测定低剂量组和高剂量组大鼠切口痛PWTL,观察各组大鼠脊髓组织形态学变化,脊髓组织NGF和BDNF表达、CXCL10和CXCR3基因mRNA及蛋白表达.结果 对照组大鼠脊髓组织细胞排列密集、紧密,数量多,模型组大鼠脊髓组织脊髓组织有空泡性损伤、液化坏死和炎性坏死灶,高剂量组和低剂量组大鼠脊髓组织较模型组大鼠改善,脊髓组织细胞密集、紧密.不同时间点,高剂量组PWTL均明显高于低剂量组(P＜0.05).低剂量组和高剂量组大鼠脊髓组织BDNF和NGF阳性细胞数与对照组大鼠比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但均明显高于模型组大鼠(P＜0.01).低剂量组和高剂量组大鼠脊髓组织细胞CXCL10和CXCR3的mRNA水平及蛋白表达均低于对照组、模型组大鼠脊髓组织细胞(P＜0.05),高剂量组明显低于低剂量组(P＜0.05).结论 地佐辛镇痛行BMSC移植术大鼠出现术后切口疼,但对治疗布比卡因腰穿注射致脊髓组织损伤无不良影响,剂量越高,镇痛效果越好.

目的 明确万氏牛黄清心丸及其组方中各单味药对朱砂致大鼠肝毒性的减毒作用.方法 成年SD大鼠,分别灌胃给予朱砂、万氏牛黄清心丸(全方)及其单味药与朱砂伍用(即黄连+朱砂、栀子+朱砂、郁金+朱砂、黄芩+朱砂、牛黄+朱砂).朱砂在每组的剂量均为1g/kg·bw.大鼠每组6只,雌雄各半.1次/d,连续给药12周.试验结束后次日取全血和肝组织,检测血汞、肝汞含量、血清肝功能指标和肝组织病理.结果 实验期间所有动物一般状况良好,体重增长正常,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).血汞、肝汞含量,黄连、栀子、郁金、黄芩与朱砂配伍组均低于朱砂组、高于全方组(P＜0.05);血清总蛋白,各单味药与朱砂伍用,均低于单用朱砂组,差异有统计学意义(P＜0.05),与全方组相比各组间差异无统计学意义(P＞0.05).光学显微镜下,朱砂组可见肝索紊乱、肝细胞肿胀、空泡变性和炎症细胞浸润等病理改变,牛黄朱砂组病变类型与朱砂组相似,程度略轻,其他各组肝组织病变轻微,偶见肝细胞肿胀、空泡变性,栀子朱砂组和全方组可见色素沉积.结论 黄连、栀子、郁金、黄芩与朱砂伍用,可减少汞吸收,进而降低肝汞蓄积水平;黄连、栀子效果明显,郁金、黄芩次之;万氏牛黄清心丸全方比各单味药与朱砂伍用拮抗朱砂肝毒性的效果更明显.

目的 测定不同浓度的丹参酮ⅡA对宫颈鳞癌细胞SIHa增殖的影响,并探讨丹参酮ⅡA的促凋亡作用.方法 常规体外培养人宫颈鳞癌细胞SIHa,24h后加入浓度为0.5、1.0、2.0和5.0mg/L的丹参酮ⅡA,继续培养24h.通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT试验检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞早期凋亡率,R123染色法检测线粒体膜电位改变.Western blot蛋白印记检测凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Caspase-3的表达情况.结果 细胞形态学观察结果显示,不同浓度丹参酮ⅡA均可导致细胞形态学发生改变;MTT试验表明,丹参酮ⅡA对SIHa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P＜0.05或P＜0.01);培养24h后流式细胞仪检测结果表明,丹参酮ⅡA培养24h后SIHa细胞出现凋亡,早期凋亡比例分别为5.8％、7.9％,10.2％和20.44％.线粒体膜电位结果表明,anⅡA组细胞线粒体膜电位呈现降低趋势(P＜0.01).Western blot蛋白质印迹结果显示,同对照组相比,不同浓度丹参酮ⅡA处理细胞24h后,丹参酮ⅡA培养组SIHa细胞Bcl-2蛋白表达呈现降低趋势,而Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达呈现上升趋势.结论 不同浓度的丹参酮ⅡA可以抑制SIHa细胞增殖并诱导其凋亡,且具有剂量依赖性.

目的 探讨原花青素拮抗砷诱导支气管上皮细胞氧化损伤作用,为揭示原花青素拮抗砷毒性作用提供参考.方法 以BEAS-2B细胞为研究对象,分别给予不同剂量As2O3(0、5、10和20μmol/L)、葡萄紫原花青素(GSPE)(0、25和50mg/L)在24和48h时,利用试剂盒检测氧化应激相关指标[活性氧(ROS)、脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)、巯基(-SH)、超氧化物气化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)]的表达.采用一般线性模型分析原花青素拮抗砷效应的交互作用.结果 与砷染毒组相比,在24和48h均发现As2O3+GSPE50mg/L组的ROS、MDA和LPO的水平降低(P＜0.05),T-AOC、GSH、GSH-Px、CAT、-SH、SOD活性和水平增加(P＜0.05),As2O3+ GSPE25mg/L组的GSH、T-AOC和SOD升高(P＜0.05).结论 在一定浓度范围内,GSPE可以有效地拮抗砷所致的氧化损伤,且随着剂量增加,抗氧化损伤效果提高.

目的 观察甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)处理后瞬时外向钾通道Kv4.2的表达,阐述Kv4.2在METH引起神经元损伤中的作用.方法 利用全细胞膜片钳的实验方法观察METH处理后瞬时外向钾电流的改变,采用Western blot法观察Kv4.2的蛋白表达及膜转移情况,并观察主导Kv4.2膜转移蛋白KChIP2(Kv channel interacting protein 2),KChIP3/4(Kv channel interacting protein 3/4)的改变,通过慢病毒上调Kv4.2,观察METH作用后,细胞凋亡标志性蛋白cleaved-caspase 3的表达.结果 不同浓度METH处理神经元细胞后,瞬时外向钾电流显著增大;在蛋白水平,METH处理后Kv4.2表达显著增高,且具剂量依赖性,此外在METH作用下,Kv4.2发生向细胞膜的转移,该过程可能与支配Kv4.2膜转移的KChIP2,KChIP3/4蛋白显著上调相关;Kv4.2高表达后,METH作用引起的神经元损伤比Kv4.2一般表达的神经元损伤更加严重,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 Kv4.2参与了METH引起的神经元损伤,因而该研究可为METH引起神经元损伤的干预提供潜在干预靶点.

目的 研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)和双酚A(BPA)混合染毒对大鼠睾丸损伤作用及与氧化应激关系.方法 将32只4周龄SD大鼠随机分为750mg/kg·bw DEHP、100mg/kg·bw BPA、750mg/kg·bw DEHP+100mg/kg·bw BPA和溶剂对照组,每组8只;用玉米油配制成相应浓度,以5ml/kg·bw容积连续灌胃染毒6周,1次/d.观察大鼠睾丸脏器系数和组织病理改变、精子数目、血清睾酮(T)和雌二醇(E2)含量,检测睾丸组织丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,以及氧化应激相关因子SOD、GSH-Px、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧合酶(HO-1)、γ-谷氨酸半胱氨酸合成酶(Gclc)和硫氧还蛋白还原酶(Txnrd)的基因表达.结果 DEHP组及混合剂量组睾丸脏器系数及3个剂量组精子数目明显低于对照组(P＜0.05),光学显微镜下可见曲细精管萎缩、生殖细胞大部分消失;混合剂量组血清T水平显著低于对照组(P＜0.05);混合剂量组MDA含量升高、SOD活性下降,DEHP组MDA含量和GSH-Px活性均升高,BPA组SOD活性降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05);混合染毒组的SOD1基因表达降低、SOD3和GSH-Px升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);混合染毒组Gclc、Txnrd和Nrf2表达低于对照组,DEHP组Txnrd表达也降低,而BPA组Txnrd、Nrf2表达均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DEHP和BPA单独及混合染毒均能导致大鼠睾丸发育不良,生精细胞减少,精子总数下降;可诱导睾丸产生氧化应激,破坏体内抗氧化稳态失衡;DEHP和BPA混合染毒可导致更严重损害.

目的 探讨氧化钕颗粒物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞毒性作用及氧化损伤作用.方法 将处于对数生长期的NR8383细胞,暴露于终浓度为0、3.125、6.25、12.5、25和50μg/ml氧化钕混悬液6、12和24h后,采用MTT法检测NR8383细胞抑制率;终浓度为0、3.125、6.25、12.5、25和50μg/ml氧化钕混悬液暴露24h后,测定细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的浓度.结果 与对照组比较,各浓度氧化钕暴露不同时间后NR8383细胞的抑制率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,稀土氧化钕暴露NR8383细胞24h后,12.5、25和50μg/ml染毒组随着染毒剂量增加,LDH水平逐渐升高;50μg/ml染毒组的T-AOC水平和12.5、25和50μg/ml染毒组的SOD水平低于对照组,25和50μg/ml染毒组MDA水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 氧化钕颗粒物暴露可致细胞毒性作用和氧化损伤作用.

目的 本文探究小儿中成药“一捻金”中朱砂经口单次给药后幼年大鼠血中汞和朱砂经口单次给药后大鼠血中汞的代谢动力学差异,为临床安全用药提供新的科学依据.方法 成年或幼年SD大鼠单次口服朱砂或“一捻金”后,于不同时间采集血液样本,应用氢化物-原子吸收法测定全血中汞浓度,比较药时曲线并计算其代谢动力学参数.结果 单次口服朱砂1g/kg·bw,成年大鼠血汞的代谢动力学参数:半衰期(t1/2)为69.3h,达峰时间(tmax)为1h,高血药浓度(Cmax)为41.2μg/L,曲线下面积(AUC)为829.9μg·h/L;幼年大鼠血汞的代谢动力学参数:t1/2为69.3h,tmax为1.5h,Cmax为137.9μg/L,AUC为1720.5μg·h/L;单次口服“一捻金”6g/kg·bw,幼年大鼠血汞的代谢动力学参数:t1/2为69.3h,tmax为2h,Cmax为63.4μg/L,AUC为1129.8μg·h/L.结论 与成年大鼠相比,幼年大鼠口服同等剂量的朱砂进入体内的量更多;而“一捻金”中朱砂较单方朱砂进入幼年大鼠体内的达峰时间更缓慢.

目的 研究褪黑素对TM3细胞睾酮分泌节律的影响,探讨钟基因Bmal1在褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌的作用.方法 运用地塞米松诱导小鼠皋丸间质细胞(TM3细胞)内源性节律的产生,通过ELISA试剂盒和实时定量RT-qPCR检测TM3细胞睾酮及类固醇急性调节基因StAR水平,研究褪黑索对睾酮节律性分泌的作用.运用siRNA干扰技术,下调钟基因Bmal1的表达,研究Bmal1在褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌过程中的作用.结果 10-6mol/褪黑素处理后,TM3细胞的睾酮浓度在ZT0、ZT4、ZT8、ZT12、ZT16、ZT20和ZT24各授时时点(zeitgeber time,ZT,光照开始的时间为ZT0)与对照组相比均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),StAR水平在ZT0、ZT4、ZT8和ZT12时点较对照组显著降低(P＜0.05).余玄分析结果显示,地塞米松作用后TM3细胞的睾酮分泌及StAR基因表达具有一定的节律性,峰值时间分别为ZT11:40和ZT8:06.褪黑素处理后,褪黑素组睾酮及StAR的节律均发生变化,表现为中值分别下降36.53％和32.09％,振幅分别减弱18.54％和44.44％.Bmal1干扰后,与对照组相比,褪黑素作用于Bmal1低表达的细胞,睾酮浓度、StAR水平及睾酮分泌节律改变差异均无统计学意义(P＞0.05);对StAR节律性表达的影响减小.结论 适当剂量的褪黑素不仅可抑制TM3细胞中睾酮水平及StAR的转录水平,而且能改变两者的节律性表达.钟基因Bmal1在褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌过程中发挥了一定的调控作用.

中国作为农业大国,农药用量一直居于世界前列.急性农药中毒发生的频率较低,而长期慢性农药中毒现象在人群分布较广泛.同时长期低剂量暴露于百草枯、阿特拉津和鱼藤酮等农药可影响多巴胺神经系统,导致神经系统慢性中毒容易引发,例如帕金森、阿尔茨海默病以及肌肉萎缩性索硬化症等神经退行性疾病[1].