果然，试管法是血清学检测的金标准

前言今天，遇到了一个很有意思的标本，并没有多特殊，却也是经历了一次理论实践过程——试管法是血清学检测的金标准。试管法：用已知的抗血清来检测受检者红细胞表面有无相应的抗原，也就是正定型；而反定型是用已知的标准红细胞来检测受检者血清或血浆中有无相应的抗体。案例经过某女性患者，83岁，因中度贫血入院，临床医生备2单位去白悬浮红细胞进行治疗，无输血史，无不良反应，孕2产2。肉眼观察患者的血标本，红细胞与血浆的量比相差很多，这是由于贫血的缘故，红细胞因某种原因而导致大量减少。血浆呈淡黄色，清透，无异常。对于这种常规备血，我们通常选择微柱凝集法进行输血相容性检测，由于今天的标本量较少，便用手工法进行检测，可检测结果出现了差异：血型检测：抗A：-，抗B :4+，抗D：4+；Ac:3+,Bc:+。

抗筛结果阴性，交叉配血相合。血型检测正反定型出现了不一致的情况，在没有再次确认的情况下，这样的结果是无法发报告的。 案例分析是否是人为因素造成的？任何试验结果出现了偏差，那么首先排除人为因素，核对患者信息是否有错，标本是否与申请单信息一致，患者标本是否采集错误等等。经核查，此标本确定是患者本人。血型检测出现不一致，要进行复查。用同种方法不同厂家的微柱凝胶卡，重新检测了一次，结果与第一次相同。是亚型还是血浆中有某种物质干扰结果？这一次，要换一种试验方法进行验证——试管法。试验结果如下：抗A：-，抗B:4+，抗D:4+，Ac:2+,Bc:?。

正定呈B型，而反定中的Bc肉眼观察试管，虽没有见到凝集的颗粒，但根据经验也区别于阴性的判定标准，细砂一样的感觉，镜下观察，呈緡钱状凝集，属于假凝集。所以可以排除是亚型的可能，怀疑血浆中存在某种物质影响到了试验结果。

根据猜想要对标本，做进一步处理。取两支试管，标记Ac和Bc,分别加入100ul血浆，反定试剂红细胞各50ul,立即离心，然后弃去血浆，再加入100ul的生理盐水，混匀之后，再次离心，然后观察结果，镜下高倍镜观察，緡钱状消失，红细胞在视野内均匀散开，正反定型一致。

红细胞在血浆中和盐水中的状态在镜下观察结果是不同的。由此可断定，血浆中确实存在干扰试验检测的物质，具体什么物质在本试验中并不重要，判断凝集是真凝集还是假凝集才是关键，真凝集那么可以判定是血浆中存在某种抗体，就要继续分析抗体物质，而假凝集那么就根据特点来判断干扰物质是什么或处理干扰物质。一般干扰血型鉴定的常见原因有以下几类：人为因素：标本或试剂搞错、抗凝剂使用不当、器材不洁、试剂污染或失败、漏加或错加试剂、结果记录或判断错误等。只要遇到检测结果出现偏差，这是首先想到的问题，也是所有试验的前提和基础。血型原因：稀有血型、亚型、嵌合体血型等。血浆蛋白的干扰：血清异常、Wharton胶或血清蛋白引起緡钱状凝集；高球蛋白血症；高纤维蛋白等。疾病影响：某些疾病（如白血病）可能导致红细胞血型抗原减弱、或者抗体效价降低。年龄因素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿、抗体水平下降的老人等。比如这个患者83岁高龄，微柱凝胶法中反定Ac只有3+凝集强度，但不影响血型的鉴定。抗体影响：非特异性抗体、特异性抗体、同种抗体、自身抗体等都可能干扰血型鉴定。药物因素：某些代血浆（如右旋糖酐）、造影剂可能造成红细胞凝集；有的药物还能刺激机体产生抗体，与红细胞发生交叉免疫反应，甚至造成溶血。红细胞输注：近期大量输注异性血。获得性抗原：最常见的是获得性B。型物质中和：一些疾病，如部分卵巢囊肿患者，其血液中血型物质的浓度很高，可中和抗-A和抗-B。总结无论是试管法还是微柱凝集法，在工作中都各自具有一定适用性和特点。微柱凝集法操作简便安全，结果清晰明确，重复性强，敏感度高，结果保存时间长，标本用量少。但是商业化的产品有严格的规定操作，是不能完全取代传统方法的。

试管法虽是传统方法，但却是能灵活解决试验出现的各种问题，可以根据试验设计加入不同的试剂量或被检标本量；也可以根据温度设置，将试管放在不同的温度环境中进行抗原抗体反应；也可将试验过程中的标本进行洗涤操作等，这些都是微柱凝集法做不到的。所以，试管法是血清学检测的金标准，处理问题要转归到传统方法上。