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Calcofluor 白色染色

2023-12-01 13:28| 来源: 网络整理| 查看: 265

Calcofluor 白色染色 – 原理、程序、结果、应用By索拉夫生物•7年2023月XNUMX日

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1961 年,Darken 报告了活跃生长的酵母和更高浓度的荧光增白剂 calcoflor White 的吸收。 真菌。 Hageage 和 Harrington 概述了钙氟白 (CFW) 的应用,以证明 菌丝 和临床标本中的酵母菌。 蒙海特等人。 利用这种染料在肺和软组织冰冻切片上进行术中鉴定真菌感染。 近年来,卡尔科弗洛白已被用来鉴定直接制备物和脱蜡组织切片中的真菌。

Baselski 和 Robison 报道了在支气管肺泡灌洗 (BAL) 标本中使用 calcofluor white 来检测 P. carinii 包囊。 Milligan 在 1992 年验证了类似的发现,表明 BAL 样本可用于检测免疫功能低下患者中由 P. carinii 和其他机会性真菌引起的感染。 威廉姆斯等人。 展示了使用 CFW 染色角膜碎屑中棘阿米巴角膜炎的荧光。 韦伯等。 发现 calcofluor white 和其他化学荧光荧光增白化学品也会对微孢子虫的孢子染色。

什么是荧光钙白染色?

Calcoflor White 是一种荧光染料,用于微生物学中,用于对真菌和某些类型的酵母进行染色。 染料结合到 细胞 真菌壁上的细胞在紫外线下发出明亮的荧光,使它们可以在显微镜下轻松观察和计数。 Calcoflor White 通常用于临床实验室,用于快速识别组织样本或其他标本中的真菌。

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Calcofluor White 是一种荧光增白剂,于 1940 年代首次作为纺织品染色剂引入。 它是荧光素和二价阳离子络合物的化合物。 在微生物学中,Calcofluor White 用作检测和区分真菌的染色剂。

染料与真菌细胞壁的纤维素成分结合,导致细胞在紫外线下发出明亮的荧光。 这使得在组织样本和其他标本中可视化真菌成为可能,这可用于真菌感染的诊断。

Calcofluor White 是临床微生物学中的重要工具,因为它提供了一种快速简便的方法来检测标本中的真菌。 它还用于真菌形态学和生理学研究,以及环境微生物学,用于评估土壤和水样中的真菌多样性。

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除了在微生物学中的应用外,Calcofluor White 还在其他领域找到了应用,包括遗传学,它用于可视化染色体,以及植物细胞壁的研究。

目标给发霉和寄生生物染色用荧光显微镜观察真菌和寄生虫的存在。Ezoic荧光钙白染色原理

Calcofluor white (CFW) 是一种水溶性无色荧光增白剂和染料,用于纺织和造纸工业。 如果临床标本中存在真菌元素,CFW 将与几丁质和纤维素上的 1-3 β 和 1-4 β 多糖结合。 当暴露在紫外线下时,该物质会发出绿色荧光。 它在荧光显微镜下可见,颜色和形状用于区分传染性物质。

CFW 在 380 nm 的波长下被激发。 calcofluor 白色染色中的吸收发生在 300 和 412 纳米之间。 它具有 347 nm 的吸收峰和 475 nm 的发射峰。 使用紫光或蓝光也能产生不错的效果,但首选紫外光,因为它可以最大化激发和荧光。 在荧光显微镜下,真菌和其他生物体(例如肺孢子虫囊肿)会发出鲜艳的苹果绿光。 绿色色调是荧光显微镜内屏障过滤器的结果。 样品中的其他元素会发出红橙色荧光。 检查组织样本时,还可以看到黄绿色背景荧光。 在蓝光下观察载玻片并采用激发剂和屏障滤光片的各种组合可以减少背景荧光。

伊文思蓝用作复染剂并通过蓝光(非紫外线)激发减少背景荧光。 添加 0.1% 伊文思蓝可降低非选择性背景荧光。 伊文思蓝复染剂还能产生橙色到宝石红色的背景对比,有助于清楚地显示周围组织内的真菌。

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Calcofluor white 是一种与纤维素和几丁质结合的不可知荧光染料。 当用长波紫外线激发时,这种化学物质可以区分含纤维素生物体的细胞壁。 为了在用氟钙白染色之前分解组织细胞,向材料中加入清洁剂,例如氢氧化钾。 将伊文思蓝染料添加到染色剂中以减少背景材料的量。

所需试剂

试剂A:氢氧化钾(CAS 1310-58-3)……………………………….125.0 g甘油(CAS 56-81-5)…………………………………………………….125.0 g软化水 (CAS 7732-18-5) …………………………..1000.0 毫升试剂B:氟钙白 (CAS 4404-43-7) ………………………………………………1.0 g伊文思蓝染料(CAS 314-13-6)………………………………………………0.4克软化水 (CAS 7732-18-5) …………………………..1000.0 毫升

其他乐器

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(1) 环灭菌装置,(2) 接种环或针、拭子、收集容器,(3) 培养箱、替代环境系统,(4) 补充培养基,(5) 质量控制生物体,(6) 载玻片、盖玻片、 (7) 荧光显微镜,(8) 搅拌器,(9) 玻片加热器,(10) 100% 酒精, (11) 95% 乙醇,(12) 二甲苯替代物,(13) 甲醇。

Calcofluor 白色染色剂的制备Calcofluor 白色染料的制造需要将 Calcofluor 白色粉末溶解在蒸馏水中。1% (w/v) calcofluor 白色染料是通过将 1 g calcofluor 白色粉末溶解在 100 ml 蒸馏水中制成的。Ezoic使用该溶液的最佳方法是将 1% CFW 溶液稀释至 0.1%。 该解决方案应保持在室温和黑暗中,以确保其寿命。在使用皮肤和指甲样本时,在使用前不久向 CFW 添加 10% KOH 溶液(10 g KOH 粉末溶于 90 ml 蒸馏水和 10 ml 甘油)是有益的。作为复染剂,可以将 0.05% 至 0.01% 的伊文思蓝溶液 (w/v) 添加到 CFW 中。 应用荧光钙白染色后,也可以使用伊文思蓝溶液。Ezoic付款方式荧光钙白染色使用真菌病原体检测所需时间大约 5 分钟优势真菌显示清晰,方法快速,灵敏度更高缺点需要荧光显微镜,不是每个常规实验室都能负担得起的Calcofluor 白色染色概述荧光钙白染色步骤首先,将样品放在干净、无油脂的载玻片中央。然后,将一滴 calcofluor 白色染料或带有伊文思蓝溶液的 CFW 添加到样品中。应将 10% KOH 添加到用于指甲和皮肤刮屑的载玻片中。然后,将盖玻片放在上面并等待一分钟。此后以 100X 至 400X 的放大倍数在 UV 灯下观察载玻片。成果 和解释

在紫外荧光显微镜下,紫光和蓝光、真菌、肺囊肿和寄生虫呈苹果绿色。

荧光钙白染色A. calcoflu 白色尿液染色表明 白色念珠菌B. 支气管肺泡灌洗 (BAL) 样本中的肺孢子菌生物体与荧光钙白染色。C. 痰的 Calcofluor 白染色显示胞内荚膜组织胞浆菌酵母细胞(箭头),

Calcofluor 白色水溶液在 300 到 412 nm 之间有吸收,在 347 nm 处有最大吸收。 这表明紫外光对于激发和荧光是最佳的,但是用紫光或蓝紫光激发也能产生不错的结果。 在紫外线、紫罗兰色和蓝光下,真菌、肺孢子虫包囊和寄生虫被荧光钙染成白色,发出壮观的苹果绿色荧光。

绿色色调是荧光显微镜中通常使用的屏障滤光片的结果。 由于可能出现非特异性反应,因此在解释 calcoflulu 白染色时需要小心。 组织样本可能具有黄绿色背景荧光,但真菌或寄生实体显示的荧光更加强大和明显。 通过在蓝光下检查载玻片或采用激发器和屏障滤光片的各种组合可以降低荧光。 肺孢子虫包囊的直径通常在 5 至 8 µm 之间,呈球形,大小均匀,包囊壁内呈现出独特的“双括号状”结构。 经过 芽接 通过内部深染色,可以将酵母细胞与 P. carinii 区分开来。

棉纤维会发出强烈的光,必须与真菌的菌丝区分开来。可能有背景荧光,但真菌表现出更强烈的光。发荧光,但滋养体既不染色也不发荧光。质量控制

使用以下质量控制生物体,Calcofluor 白色染色试剂盒的所有批号都经过评估和验证是可以接受的。 控制生物体的检查应遵守公认的实验室质量控制协议。 如果观察到异常的质量控制结果,则不应发表患者结果。

Ezoic系统结果须癣毛癣菌 ATCC® 9533亮绿色荧光大肠杆菌 ATCC® 25922弱到无荧光荧光钙白染色的应用

为了快速识别真菌感染,荧光钙白染色被广泛用作其中一种方法。 以下是荧光钙白染色的一些更具体的应用:

Calcofluor white 是一种敏感染色剂,有助于菌丝、假菌丝和酵母的可视化。 由于处于发芽过程中的酵母中几丁质含量更高,因此氟钙白对芽痕的染色更强烈。Calcofluor 白色染色有助于检测不可培养的真菌,例如耶氏肺孢子菌。Calcofluor 染色可用于观察非真菌制剂,例如自由生活的变形虫(棘阿米巴、耐格里阿米巴和 Balamuthia)和恶丝虫幼虫。 使用角膜刮屑和角膜切除术材料,Calcofluor 白色染色有助于快速检测棘阿米巴角膜炎。因为它可以生存 高压灭菌器 温度(121°C 15 分钟),可将 Calcoflor 白色染色剂放入生长介质中。 因此,calcoflor白色染色剂可以用作在载玻片上培养真菌的重要染色剂。营养细胞,而不是子囊孢子,被荧光钙白染色。 因此,当引入子囊孢子诱导培养基时,它会促进分化。荧光钙白染色的优点

Calcofluor White 染色是微生物学中广泛使用的技术,用于检测样品中的真菌和其他含纤维素结构。 这种染色方法的主要优点包括:

高灵敏度: 即使在低浓度下,Calcofluor White 也能够检测样品中的真菌和其他含纤维素结构。使用方便: 染色过程简单,可在短时间内完成。快速结果: 染色反应很快,可以快速分析样品。高性价比: 与其他染色方法相比,Calcofluor White 相对便宜。多功能: 染色可用于各种类型的标本,包括涂片、组织切片和培养物。

总的来说,Calcofluor White 染色是检测样品中真菌和其他含纤维素结构的宝贵工具,可提供快速、灵敏且经济高效的结果。

Calcofluor 白染色的局限性

Calcofluor White 染色是微生物学中广泛使用的技术,但它也有一定的局限性,包括:

CFW 是一种荧光增白剂,有助于通过形态分化检测特定细菌。 明确的诊断可能需要额外的生化和血清学测试,或通过其他染色方法进行确认。根据研究,隐球菌荚膜不会被 CFW 染色。 为此,建议采用替代检测方法,例如用印度墨水直接检查 有机体.比真菌、细菌和碎屑发光的程度要小一些。P. carinii、棘阿米巴和微孢子虫不会发光,除非同时使用试剂 A 和 B。荧光增白剂产生的荧光会随着时间的推移而消退,尤其是在较薄的部分; 然而,荧光可以通过重新染色来恢复。如果一种材料含有大量非特异性碎屑或酵母,则应使用另一种染色方法来检查它是否存在微孢子虫。 所有微孢子虫阳性结果都必须使用改良的三色染料进行验证。

总的来说,虽然 Calcofluor White 染色是检测样品中真菌和其他含纤维素结构的重要工具,但在解释结果时考虑这些限制很重要。

荧光钙白染色 程序示例真菌成分和酵母将标本放在干净的载玻片上。加入一滴试剂 A 并小心搅拌。加入 1 滴试剂 B 并充分搅拌。用干净的玻璃盖玻片盖住载玻片,并用荧光显微镜观察。 观察荧光和特征形态。棘阿米巴包囊将标本放在干净的载玻片上并使其在空气中干燥。 合适的标本包括角膜刮片或活组织检查、结膜或角膜溃疡、隐形眼镜设备和至少 100 cc 的浓缩水。 如果感染广泛,可能需要更多的标本。在甲醇中 2 分钟固定载玻片。也可以使用石蜡切片(6 m 厚)。 A。 将载玻片浸泡在二甲苯替代品中 1 至 2 分钟以去除石蜡。 b. 将载玻片浸泡在酒精中十二次。 十二次,将载玻片浸入 95% 乙醇中。 d. 用软化水轻轻冲洗载玻片并沥干。加入一滴试剂 A 并小心搅拌。与一滴试剂 B 混合。让污渍静置五分钟。 用软化水冲洗掉多余的变色。 在幻灯片上放置干净的玻璃盖玻片后,使用荧光显微镜检查标本。 观察荧光和特征形态。小孢子虫最常见的材料是新鲜或保存(福尔马林或 SAF)粪便标本,但其他标本如组织、十二指肠吸出物、浓缩尿液、痰、脑脊液、鼻分泌物、BAL 和结膜也是可以接受的。 将薄样品 (10 µl) 放在干净的载玻片上,然后在载玻片加热器上以 60o C 加热固定直至干燥。在甲醇中固定载玻片两分钟。加入一滴试剂 A 并轻轻混匀。加入 1 滴试剂 B 并充分搅拌。染色一分钟,然后用去离子水冲洗去除多余的污渍。 用干净的玻璃盖玻片覆盖幻灯片时,用荧光显微镜检查标本。 应观察荧光和特征形态。卡氏肺孢子虫首选标本是浓缩 BAL(10 至 25 升)或组织活检。 诱发痰液时会显示敏感性降低。 将标本放在干净的载玻片上,自然晾干。在甲醇中 2 分钟固定载玻片。加入一滴试剂 A 并小心搅拌。与一滴试剂 B 混合。染色六十 (60) 秒 用软化水冲洗掉多余的变色。 在幻灯片上放置干净的玻璃盖玻片后,使用荧光显微镜检查标本。 观察荧光和特征形态。

解释

真菌成分、酵母具有典型形态的明亮苹果绿色荧光棘阿米巴包囊包囊 (10-25 μm) 呈波纹状和双层壁,带有明亮的苹果绿色荧光和明亮的橙色细胞质菌弱到无荧光; 典型的球状或杆菌状小孢子虫苹果绿荧光; 肠道微孢子虫孢子的大小范围为 0.9-1.5 μm 至 1.2-2.0 μm, 细胞壁 变亮但染色不特异卡氏肺孢子虫明亮的苹果绿色荧光,包囊直径5-8μm,最多含8个新月形或多形的子孢子; 囊肿内的细胞壁和双括号结构染色强烈常见问题解答 什么是 Calcofluor White 染色?

Calcofluor White 染色在微生物学中用于检测样品中的真菌和其他含纤维素结构。

Calcofluor White 染色如何工作?

Calcofluor White 与真菌细胞壁中存在的纤维素结合并导致细胞发出荧光,从而便于观察和识别。

Calcofluor White 染色有哪些优点?

主要优点包括高灵敏度、易用性、快速结果、成本效益和多功能性。

Calcofluor White 染色的局限性是什么?

一些限制包括与其他染料的干扰、假阳性、分化差、特异性有限、光漂白以及在组织样本中可视化真菌的能力有限。

什么类型的样品可以用 Calcofluor White 染色?

Calcofluor White 可用于各种类型的标本,包括涂片、组织切片和培养物。

Calcofluor White 染色需要多长时间?

染色反应很快,可以快速分析样品。

Calcofluor White 染色贵吗?

与其他染色方法相比,Calcofluor White 相对便宜。

Calcofluor White 染色会干扰其他染色程序吗?

是的,Calcofluor White 会干扰染色过程中使用的其他染料,可能会影响结果的准确性。

Calcofluor White 染色法可用于检测组织样本中的真菌吗?

是的,Calcofluor White 染色可用于检测组织样本中的真菌,但由于存在也与染色结合的其他细胞结构,它可能无法提供最佳结果。

Calcofluor White 染色是否可以清楚地区分不同类型的真菌?

不,Calcofluor White 染色不能清楚地区分不同类型的真菌。

参考资料Punjabi V、Patel S、Pathak J、Swain N. 使用荧光显微镜比较评估荧光钙白和吖啶橙对念珠菌属物种的染色效果——一项前瞻性微生物学研究。 J 口腔颌面病理学杂志。 2020 年 24 月至 1 月;81(86):10.4103-315。 doi: 18/jomfp.JOMFP_2020_8。 Epub 32508453 年 7269299 月 XNUMX 日。PMID:XNUMX; PMCID:PMCXNUMX。https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/383/810/18909bul-mk.pdfhttps://assets.fishersci.com/TFS-Assets/LSG/manuals/IFU40015.pdfhttps://static.igem.org/mediawiki/2019/3/31/T–Purdue–Protocols.pdfhttp://biology.fullerton.edu/facilities/em/library/calcofluor.pdfhttps://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/calcofluor-whitehttps://www.dalynn.com/dyn/ck_assets/files/tech/SC15.pdfhttps://microbeonline.com/calcofluor-white-staining-principle-procedure-and-application/https://biotium.com/product/calcofluor-white-stain-5-mm-water/https://biotium.com/wp-content/uploads/2016/04/PI-29067.pdf

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