Androgen Receptor(AR)靶点介绍及实验小贴士

   Androgen Receptor（AR）属于核受体超家族中的类固醇受体，作为转录因子调控真核生物基因表达，在生殖、骨骼肌、心血管、神经、免疫、造血系统的发育和稳态维持方面起重要作用。

   AR包含4个功能结构域：N端转录调控域(NTD)，高度保守的DNA结合域（DBD）、铰链域和配体结合域（LBD）。AR内部有许多信号序列，包括转录激活信号AF1，AF2，核定位信号NLS，核输出信号NES。

   配体缺失时，AR定位于细胞质，与热休克蛋白（如HSP90、HSP70）和其他分子伴侣蛋白结合在一起。雄激素与AR结合后，构象的变化会使AR与分子伴侣解离并暴露出NLS。随后雄激素/AR复合物转运到细胞核，发生二聚化并结合至靶基因的雄激素应答原件（ARE）调控基因转录。

   雄激素与AR结合后，也可以短时间内会激活第二信使信号通路，调控靶基因的转录和翻译。

   AR信号通路的异常与多种肿瘤发展相关，如前列腺癌、膀胱癌、肝癌、肾癌、肺癌等。

   AR主要在雄激素靶向的组织中表达，其表达丰度在雄性的储精囊、附睾、睾丸、前列腺等组织中尤其高。

   人源Androgen Receptor异构体2（P10275-2）：主要在心脏和骨骼肌表达。

   人源Androgen Receptor异构体3（P10275-3）：前列腺基底和基质细胞表达（蛋白水平）。

   细胞核，细胞质。

   人（P10275）： 异构体1：99 kDa（预测）；异构体2：45 kDa（预测）                               异构体3-4：67-68 kDa（预测）

   小鼠（P19091）：99 kDa（预测）

   大鼠（P15207）：99 kDa（预测）

   泛素化

   磷酸化

   棕榈酰化

​WB实验贴士

   使用人源样本进行WB实验时，Androgen Receptor可能会检测到多条条带，因为人源Androgen Receptor不仅含有多个异构体，还存在翻译后修饰。

   请注意不同样本中靶标蛋白的表达量存在差异，检测前需要确认靶标蛋白表达量。 推荐抗体产品说明书中使用的样本作为阳性对照。

   Androgen Receptor裂解液冻存后易降解，在WB实验中，建议使用新鲜的裂解液，当天完成样品制备和跑胶，避免出现碎片化杂带。

   若某些样本使用RIPA裂解后出现无条带/目的条带较弱/非特异性条带，可以尝试使用1% SDS 热裂解制备方法。

   若待检测样品Androgen Receptor表达量偏低，可以尝试在显影时适当延长曝光时间。

   人LNCaP全细胞裂解液

   小鼠睾丸组织裂解液

   大鼠睾丸组织裂解液

   人PC3全细胞裂解液

   小鼠肝脏组织裂解液

   大鼠肝脏组织裂解液

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     添加足够量的复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     选择合适的裂解液来富集更多靶标蛋白。

     整个样本制备过程中，保持样本置于冰上。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

  电泳

     至少上样20μg总蛋白进行电泳。

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议使用较低浓度的分离胶进行电泳。

  转膜

     SDS至终浓度为0.1%。

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议使用0.45μm的PVDF膜。

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。

     建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功（如果选择荧光标记检测，请确保丽春红完全清洗干净）。

   封闭

     没有适用于所有体系的封闭液，请选择合适的封闭液。