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羊痘病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书 【产品名称】 通用名:羊痘病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 英文名:Test Kit for Antibodies to Capripox virus(ELISA) 【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒 【预期用途】 羊痘是由羊痘病毒引起的一种人畜共患病,以体温升高,皮肤出现痘疹为主要特征。 本试剂盒用于检测羊血清中羊痘抗体,可用于羊痘疫苗免疫效果评价或该病的辅助诊断。 【原 理】 本试剂盒由预包被羊痘核蛋白抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测羊血清样本中羊痘抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有羊痘抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中抗体含的特异性量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有羊痘抗体。 【试剂盒组成】 序号 名称 规格/96T×1 规格/96T×2 规格/96T×5 1 酶标记物 11ml×1(红盖) 11ml×2(红盖) 26ml×2(红盖) 2 样品稀释液 50ml×1(黄盖) 50ml×1(黄盖) 200ml×1(黄盖) 3 20X浓缩洗涤液 40ml×1(白盖) 40ml×1(白盖) 200ml×1(白盖) 4 底物液A 6ml×1(白盖) 11ml×1(白盖) 26ml×1(白盖) 5 底物液B 6ml×1(黑盖) 11ml×1(棕盖) 26ml×1(黑盖) 6 终止液 6ml×1(黄盖) 11ml×1(黄盖) 26ml×1(黄盖) 7 阳性对照 1.0 ml×1(红盖) 1.5 ml×1(红盖) 2.0 ml×1(红盖) 8 阴性对照 1.0 ml×1(绿盖) 1.5 ml×1(绿盖) 2.0 ml×1(绿盖) 9 酶标板 96T×1 96T×2 96T×5 10 盖板膜 1 2 5 11 自封袋 1 1 2 12 说明书 1 1 1 13 稀释板 1 2 5
【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。 包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。 【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。 【样品准备】 1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。 2.用样品稀释液将待检血清先按10倍稀释(如在稀释板中加入90μl样品稀释液再加10μl血清,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。 3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。 【检验方法】 1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。 2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。 3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入样品稀释液90μl,再加入稀释后的血清10μl。 注:样本稀释比例相当于1:100。 4.混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。 5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。 6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。 7.洗涤,同步骤5。 8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应10分钟。 9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。 【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照≤0.2,阳性对照≥0.6。 【检验结果的解释】 1.C.O(临界值)=2.1×阴性对照均值(阴性对照均值小于0.1时按0.1计算); 2.样品A值>C.O为阳性,样品A值≤C.O为阴性。 【试验方法的局限性】 该试验仅作为定性检测羊血清中羊痘IgG抗体。 【注意事项】 1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。 2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。 3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。 4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以溶解。 5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。 6.用于检测的样品应保持新鲜。 7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。 8.不同批号试剂组分不得混用。
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