脑声常谈：浅析瘙痒小鼠模型的建立及瘙痒行为（抓挠行为）的测试方法

瘙痒是多种皮肤病，或以皮肤干燥为特点的皮肤病如老年干燥症、特异性皮炎和季节性干燥症等的症状，系统性疾病如肾功能衰竭、胆汁淤积也会引起严重的皮肤干燥症瘙痒。皮肤干燥主要由于角质层持水能力降低引起，而角质层持水能力受皮肤屏障功能的调节。研究表明，皮肤干燥症瘙痒的特征是角质层水合作用降低，皮肤屏障破坏的特征是表皮皮肤水分流失增加，皮肤干燥或皮肤屏障破坏与皮肤干燥症瘙痒相关。目前，皮肤干燥症瘙痒的发病机制尚未完全明确，缺乏有效的治疗方法，建立适宜的动物模型，有助于研究其发病机制。现阶段制备皮肤干燥症瘙痒 动物模型主要通过在皮肤上涂抹有机溶剂或表面活性剂，给予不含必需脂肪酸的饮食，胶带剥离的物理破坏方法，其机制为去除角质层中的脂质成分如神经酰胺、胆固醇和游离脂肪酸，破坏皮肤的屏障功能。此外，也可将动物暴露在干燥环境中使其皮肤水分丢失增多。但上述方法制备的模型均不会引起皮肤瘙痒，未能引出动物搔抓动作，提示角质层水合作用减少和经表皮水分流失增多不会引起皮肤干燥症瘙痒。丙酮／乙醚 和 水 （ａｃｅｔｏｎｅ－ｅｔｈｅｒ－ｗａｔｅｒ，ＡＥＷ）贯序涂抹可破坏皮肤屏障，经皮水分损失增加，引起皮肤干燥、瘙痒。

剃除小鼠颈背部毛发（上自两耳连线，下至第二胸椎节段，面积约２ｃｍ×２ｃｍ）直至皮肤完全显露。ＡＥＷ 组：参照文献方法制备皮肤干燥症瘙痒小鼠模型。丙酮和乙醚等体积混合，浸泡棉片，于上午９时和下午５时，在小鼠颈背部剃毛处涂抹15ｓ，然后用浸泡蒸馏水的棉片于同一部位涂抹30ｓ，连续7ｄ。对 照 组：小鼠颈背部剃毛处皮肤涂抹蒸馏水，涂抹方法同 ＡＥＷ 组。

小鼠１ｈ抓挠次数测定通过计数小鼠１ｈ的抓挠次数来评估瘙痒的严重程度。分别于造模第 １、３、５、７天早７时，将小鼠置于12cm×12cm×12cm的透明观察笼中，适应10min后，在安静环境下持续 拍摄１ｈ，由另２位不知分组情况的研究人员计数小鼠抓挠次数。小鼠后爪离开地面，对颈背部涂抹部位皮肤１次或多次抓挠、后爪落地或小鼠舔、吃、撕咬后爪，为１次抓挠。前爪抓挠或后爪抓挠涂抹部位以外的其他部位皮肤不进行计数。

上海欣软，VisuScratch抓挠行为自动测试系统，型号：XR-XVS201

于造模第１、３、５、７天，将小鼠固定于手术台，观察颈背部皮肤水分变化，是否有剥脱和鳞屑，并拍照。

皮肤干燥症临床常见，常继发于其他皮肤病，或是一些系统性疾病的晚期并发症，持续的皮肤干燥可以引起瘙痒和表皮增厚，严重影响患者的生活质量。临床治疗皮肤瘙痒的药物主要是抗组胺药，而皮肤干燥症引起的瘙痒是一种难治性瘙痒，抗组胺药治疗疗效有限。因此，制备动物模型研究皮肤干燥症瘙痒的发病机制，有助于其临床治疗。

目前研究皮肤干燥症瘙痒的动物模型主要有急性瘙痒模型和慢性瘙痒模型。在急性瘙痒模型中，主要是对各种致痒 物进行外周皮下注射 （组 胺 或 氯 喹等）或 椎管内注射 （吗啡或降钙素基 因相关肽等），引起小鼠短暂的抓挠动作，一般抓挠动作在给药１ｈ内结束。急性瘙痒模型主要用于研究各种致痒物引起瘙痒的传导途径和相关受体。慢性瘙痒模型一般分为转基因鼠、基因敲除鼠和普通小鼠制备的慢性瘙痒模型。制备转基因和基因敲除动物慢性瘙痒模型技术难度 大，过程复杂，普通研究人员不易获得。普通小鼠慢性瘙痒模型目前主要有干燥症模型和接触性皮炎模型等，分别模拟临床皮肤干燥症引起的瘙痒和变应性皮炎引起的瘙痒。

丙酮、乙醚为有机溶剂，涂抹于脱毛的皮肤表面可有效破坏皮肤的脂质屏障，继续涂抹蒸馏水，使水分随着有机溶剂的挥发进一步减少，可模拟皮肤干燥症瘙痒模型。相对于其他品系的小鼠，Ｃ５７ＢＬ／６小鼠更易诱发出抓挠行为，是转基因、基因敲除鼠的制备材料，因此 本 研 究 选 择 Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠为实验动物，通过ＡＥＷ 贯序涂抹法制备小鼠皮肤干燥症瘙痒模型。实验在拍摄记录小鼠抓挠次数时选用 12cm × 12cm×12cm 的透明笼，既避免了容器过小引起小鼠紧张焦虑进行抓挠而影响结果，又避免了容器过大拍摄不方便计数出现差错。在每天涂药前拍摄，与最后一次涂药间隔15h以上，避免了由于涂抹试剂本身对实验动物的刺激引发的瘙痒，客观地反映了小鼠的抓挠次数。

中华实用诊断与治疗杂志2020年３月第３４卷第３期 ＪＣｈｉｎＰｒａｃｔＤｉａｇｎＴｈｅｒ，Ｍａｒ．２０２０，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．３，金锦花，李科岩，王玉慧，薛富善《皮肤干燥症瘙痒小鼠模型的建立》

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