【标准·方案·指南】流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识（2019版）

二、标本采集和运输

首选乙二胺四乙酸盐抗凝管采集外周静脉血标本，肝素钠或枸橼酸钠抗凝血也可用于检测，但如标本同时进行白细胞计数分类，则应选择乙二胺四乙酸作为抗凝剂。标本采集后应立即检测，不能立即检测的标本应置室温保存[4]，并在24 h内检测。

三、检测对象的选择

（一）明确存在免疫功能受损者——原发性免疫缺陷病（primary immunodeficiency diseases,PID）

PID是一组先天性或遗传性因素所致的免疫器官、组织、细胞或分子缺陷，导致机体免疫功能不全的疾病。2017年国际免疫学会联合会（international union of immunological societies，IUIS）将PID分为9类共354种疾病[5]。

PID常表现为婴儿期或儿童期频繁（反复）发生的特殊感染。大约80%的患儿发病年龄小于20岁，遗传方式常为X连锁，70%的患儿为男性。有临床表现的PID发病率总体上约为1/10 000。常见的是抗体缺陷为主的免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。淋巴细胞亚群分析是早期诊断PID的重要手段，对于临床考虑PID或基因检测明确的PID患儿，应检测其淋巴细胞亚群，评估其免疫状态。

（二）可能存在免疫功能受损者

1．免疫防御功能受损者：

此类患儿常见的临床特征为易发生感染，往往是反复、严重、多种病原体或特殊病原体的感染，以及常规治疗效果不佳的感染。包括（1）反复感染，即明确为感染性疾病，感染次数和频率过高，超出正常人群，因感染的部位不同，具体反复的次数或频率难以给出参考标准[6]。（2）严重感染，包括必须住院静脉使用抗感染药物的患儿以及需进行重症监护或抢救的感染患儿[7]。（3）多种病原体和（或）特殊病原体感染，发生细菌、真菌和（或）病毒等多种病原体感染者；低毒病原体如卡介苗[8]、脊髓灰质炎疫苗株等病原体感染者；对于新发现的病原体或病原体不清楚的感染者尤其应该进行淋巴细胞亚群的检测。（4）常规治疗效果不佳的感染，即按照诊疗常规或指南治疗效果不佳的感染，除病原体耐药等原因外，还可能存在宿主免疫防御的受损，应及时进行淋巴细胞亚群的检测。（5）感染本身导致宿主继发性免疫防御功能受损者，如EB病毒感染[9]、人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染等。

2．免疫自稳和耐受功能受损者：

此类患儿常见的临床表现为易发生自身免疫或自身免疫样疾病、过敏或过敏样疾病。（1）过敏性疾病，并非所有这类患儿都需要进行淋巴细胞亚群的检测，对于伴有以下情况的过敏患儿应考虑淋巴细胞亚群的检测，①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现[10]；②嗜酸粒细胞显著增多[11]；③血清IgE水平明显增高（IgE>1 000 U/L）[12]；④伴有反复、严重感染的患儿；⑤常规治疗效果不佳者。（2）自身免疫和自身炎症性疾病，检测淋巴细胞亚群有助于明确淋巴细胞各个亚群可能存在的原发性或继发性异常，有助于对患儿免疫状况及药物治疗影响的评估。对于伴有以下情况的自身免疫和自身炎症性疾病患儿应考虑淋巴细胞亚群的检测，①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况[13]；②合并反复感染的患儿；③存在自身炎症反应；④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后[14]。

3．免疫监视功能受损者：

免疫监视功能受损主要引起机体易发生肿瘤性疾病。包括（1）血液系统肿瘤，为儿童时期最多见的肿瘤，应常规进行淋巴细胞亚群检测。（2）其他系统肿瘤及实体瘤，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多会受到影响，应进行淋巴细胞亚群的检测。

（三）其他特殊情况

1．血常规显示淋巴细胞数量明显异常。

2．有免疫缺陷病家族史。

淋巴细胞亚群分析结果判读，应把淋巴细胞亚群的相对计数和绝对计数结合起来进行判别。

（一）基本数据判断

1．相对计数的3个基本公式：

应首先根据下述3个公式进行淋巴细胞亚群的基本数据的判断。公式一：（CD3++CD19++CD16+CD56+）%=（100±5）%；公式二：（CD4++CD8+）%=（CD3+±5）%；公式三：CD4+/CD8+>1。

2．相对计数基本公式的意义：

CD3++CD19++CD16+CD56+明显大于或小于（100±5）%，提示检测系统异常或存在明显淋巴细胞亚群异常。CD4++CD8+百分比明显大于或小于CD3+百分比，提示存在双阳性（CD4+CD8+）或双阴性（CD4-CD8-）T淋巴细胞。正常情况CD4+/CD8+>1，年龄越小，CD4+/CD8+越大。CD4+/CD8+