维生素C不同的测定方法和优缺点比较

陆廷姣

贵州省检测技术研究应用中心、 贵州省贵阳市 550000

摘要：现阶段，维生素C的测定方法有很多种，包括荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法以及色谱法等等，上述方法对于实际样品的测定均有满意的效果。现阶段我国维生素C测定方法还是以光度法为主导，近年来色谱法，尤其是HPLC法运用较多。本文针对维生素C不同测定方法及优缺点进行了比较分析，以此为相关研究提供一定的参考。

关键词：维生素C；测定方法；优点；缺点

一、引言

维生素C测定方法的种类多样，每样方法都具备明显的优势，也存在一定的不足。现阶段国内常用的测定方法以光度法、电化法、色谱法、HPLC法为主。基于此，本文对常用的维生素C测定方法进行分析，对比其优势与缺点，为相关研究提供一定的参考。

二、常用维生素C测定方法及优缺点

（一）荧光法

1.原理

样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸之后，同邻苯二胺反应生成具备荧光的喹喔啉[1]。其中，荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下会形成正比。运用这一方式来测定抗坏血酸与脱氢抗坏血酸的总量。

2.优点

脱氢抗坏血酸与硼酸能够形成复合物，但是不会与OPDA反应，可以有效的排除荧光杂质的干扰。且最小检出限是0.022g/mL。能够广泛应用于蔬菜、水果以及相关制品的总抗坏血酸的测定。

3.缺点

首先，一些植物组织之中都含有破坏抗坏血酸的氧化酶，所以在测定的过程中需要挑选新鲜的样品，并且要尽快使用偏磷酸-醋酸来提取样品支撑匀浆，才能够保存维生素C。其次，一些果胶含量较高的样品不容易过滤，需要运用抽滤或离心方式，取上清液过滤。最后，活性炭能够将抗坏血酸氧化成脱氢抗坏血酸，但是其也具备吸附抗坏血酸的作用，所以需要注意活性炭的用量准确性。

（二）2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC）

1.原理

2，6-二氯靛酚是还原型抗坏血酸还原染料，遇酸呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚之后，其自身被氧化为脱氢抗坏血酸。此时滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。应用这一染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点。依据染料的消耗量便可以计算出样品中还原型抗坏血酸的含量[2]。

2.优点

该方法具有便捷性与快速准确的优势，同时适用于不同类型的样品的分析。

3.缺点

该方法虽然简便有效，但是药品价格昂贵。同时，无法直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，很容易受到其他还原物质的干扰。若样品之中具有色素类的物质，便会为滴定终点的观察造成一定的困境。

（三）2，4-二硝基苯肼法

1.原理

总抗坏血酸主要由还原型、脱氢型以及二酮古洛糖酸组成。样品中的还原型抗坏血酸由活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，同时与2，4-二硝基苯肼作用形成红色脎，脎的含量同总抗坏血酸含量成正比关系，以此进行比色测定。

2.优点

首先，能够广泛的应用于蔬菜、水果及其制品之中的总抗坏血酸的测定[3]。其次，此方法是脎比色法，是维生素C测定的国标法之一，也是一种全量测定法，与之前的苯肼法原理近似。近期为了消除色泽与背景不一的问题，国标中这一方法强调空白，也就是每一样品及标准系统都需要作对应空白。

3.缺点

首先，这一方法的应用于杨梅汁维生素C的测定实验中，所消耗的操作时间较长，操作要求严格，试剂也较多，适用于一般实验室。其次，该方法很容易受到色素的影响，如果待测液体自身有颜色，便会影响吸光值，继而影响测定结果的准确性。

（四）分光光度法

1.测定原理

维生素C在空气中很容易被氧化为脱氢抗坏血酸，尤其是在碱性介质下。PH＞5，则脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸[4]。其中，脱氢抗坏血酸与二酮古洛糖酸都可以与2，4-二硝基苯肼形成脎，能够溶于硫酸之中。脎在500nm波长具备最大吸收。按照样品溶液吸光度，按照工作曲线查找维生素C浓度，也就可以计算出维生素C的含量。

2.优点

灵敏度较高，操作便捷与迅速的方式，可以广泛的应用于多种物质的测定。

3.缺点

需要对特定波长处或者一定波长范围中光的吸收度进行测量，对该物质进行定性与定量分析。吸光度的读数需要控制在007范围内，吸光度的测定及样品的处理过程，要求较高。

（五）林钼蓝分光光度法

1.测定原理

染料2，6-二氯靛酚的颜色反应主要表现在两种特性。首先是其氧化还原状态，氧化态与还原态分别为蓝色与无色。其次是受到其介质的酸度影响，在碱性溶液与酸性介质之中分别呈现深蓝色与浅红色。利用蓝色的碱性染料标准溶液，对含有维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原成无色。达到滴定终点的时候，多余的染料在酸性介质之中表现为浅红色，运用染料用量来计算样品之中还原型抗坏血酸的含量。