诱导THP

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作者：

郭强，阴海鹏，李翠玲，任霞，周宪宾，姜国胜

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摘要：

研究背景:巨噬细胞是重要的免疫效应细胞,在固有免疫和适应性免疫应答中发挥重要作用.巨噬细胞是高度异质性的细胞,受局部微环境的影响可活化为不同的类型,展现出不同的表型和功能.由于巨噬细胞在不同的组织环境和生理,病理条件下的异质性,巨噬细胞被分为两种主要类型:M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞.在体外实验中,人巨噬细胞通常源自分离的外周血单核细胞,与小鼠巨噬细胞可源自骨髓,腹腔或组织相比来源明显较窄.将人白血病细胞诱导分化成为巨噬细胞是体外进行人巨噬细胞研究的重要手段.目的:我们将THP-1细胞诱导为巨噬细胞,继而用细胞因子将其诱导成为M1,M2型巨噬细胞.结合多个标志,对诱导的M1,M2型巨噬细胞进行鉴定,为下一步通过THP-1细胞诱导分化的M1,M2巨噬细胞进行的基因,功能等研究奠定基础.方法:用PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞分化,采用细胞形态学和特异分化抗原确定诱导分化模型的建立.在此基础上,用LPS和IFN-γ诱导其向M1型巨噬细胞分化,用IL-4诱导其向M2型巨噬细胞分化,以未加细胞因子组为对照,利用细胞形态,荧光定量PCR(qRT-PCR),流式细胞术(FACS)鉴定诱导的M1和M2型巨噬细胞.结果:PMA(10ng/m1)诱导THP-1细胞72h,发现绝大部分细胞贴壁,部分细胞体积变大,核质比降低,胞质的染色变浅;PMA(10ng/m1)诱导THP-1细胞48-72h,FACS检测发现约84.8%的细胞表达CD1 1b,约90.8%的细胞表达CD14.M(IL-4)组的纺锤形细胞明显比M(LPS+IFN-γ)组多;qRT-PCR检测了M1型细胞的标志,发现M(LPS+IFN-γ)组显著高表达CD80,CXCL9,CXCL10,检测了M2型细胞相关分子ALOX15,CCL13,CCL22,CD1a,CD1b,CD200R,S100A4的表达,发现仅ALOX15在M(IL-4)组高表达,其它基因的表达与M(LPS+IFN-γ)组无明显差异;FACS检测了CD80的表达,发现M(LPS+IFN-γ)组(2.8%)明显高于M(IL-4)组(0.7%)(P0.05).结论:与文献报道的传统的鉴定M1,M2型巨噬细胞的标志不完全一致,本方法通过细胞形态,qRT-PCR和FACS鉴定了THP-1细胞诱导的M1和M2型巨噬细胞,可为基因,功能等研究奠定坚实基础.

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关键词：

巨噬细胞 THP-1细胞 ALOX15

会议名称：

第九届全国免疫学学术大会论文集

会议时间：

2014年

会议地点：

中国山东济南