【求助】摸索ELISA封闭液时出现的问题

2024-05-11 18:05| 来源: 网络整理| 查看: 265

我做的间接ELISA，起初封闭用5% 脱脂奶粉，效果还可以，阴性和阳性区别明显。现在想摸索下封闭液的种类，就选择了很多种封闭液，包括原来用的5% 脱脂奶粉，可是结果出来后，阳性和阴性血清OD值之间基本没有差别，数值差不多，都在1.4-1.6之间。连以前用的5%脱脂奶粉都这样，不知道为什么？？？唯一变化的条件：以前稀释一抗和二抗都是用封闭液，即5% 脱脂奶粉；而这次用了PBST。请教各位，这个可能是原因么？基本是抗体稀释未加奶粉的原因我用10％BSA封闭。加抗体时都含有1％BSA，不加的话背景会很高。另外都用PBST配的BSA溶液，不是用水

看你的OD值很高，很可能是这个原因

你的空白孔如何？你的空白孔如何？0.1~0.2谢谢楼上的，我今天验证了一下，确实是抗体稀释液的问题不客气帮到人的感觉真的很不错啊，呵呵楼上能不能解释一下，为什么稀释液中不含封闭液成分背景就会高呢？不是很明白啊。关于稀释一抗二抗的问题,本人从原理和实践方面也建议用封闭液稀释效果会好一些.原因如下:

封闭液中的蛋白可以与特异的抗原或抗体非特异性的竞争相应的抗体或抗原还有保护作用，同时也有再封闭作用，不过还是一种竞争，防止非特异结合导致的背景升高.避免假阳性.

祝君实验顺利啊!

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