pGL3

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作者：

钟良英，丁红珂，刘敏，黄彬，何小洪，陈培松

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摘要：

目的扩增BMP2基因下游110kb处的预测有增强子功能的非编码序列,将其插入pGL3-promoter载体,构建该长片段的真核表达系统.方法在所设计的上下游引物的5'端加入BamHⅠ酶切位点,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从短指畸形患者外周血提取的DNA中扩增BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列.首先将扩增的目标片段与PGEM-T载体连接,连接产物转化DH5α感受态细菌,经蓝白斑筛选出的阳性克隆通过电泳,酶切鉴定后进行测序验证是否为插入的目标序列,测序正确后提取重组质粒.利用限制性内切酶BamHⅠ同时酶切插入目标序列的质粒和pGL3-promoter载体,将酶切完全的目标序列与线性pGL3-promoter空质粒载体在Solution I快速连接酶的作用下进行连接反应,构建目标序列的真核表达载体.结果经过酶切和测序证实含有4.8kb长的目标序列的分子克隆和真核表达载体构建成功.结论实验成功克隆了BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列,并构建了pGL3-promoter-enhancer真核表达载体,为进一步验证该序列可能的调控功能奠定了基础.

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关键词：

BMP2基因 非编码区域 长片段分子克隆 pGL3-promoter载体

DOI：

CNKI:SUN:ZYYA.0.2013-09-007

被引量：

1

年份：

2013