定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β

2024-07-17 05:34| 来源: 网络整理| 查看: 265

Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2021 Mar 20; 52(2): 235–240. Chinese. doi: 10.12182/20210160508PMCID: PMC10408909PMID: 33829697

Language: Chinese | English

定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响Influence of Dingkun Dan Combined with Estradiol Valerateon Wnt/β-catenin Signaling Pathway in Rats with Thin Endometrium with Kidney-Yang Deficiency娟郑1,2 and 勇谈2,*娟郑

1 河南省中医院（郑州 450002）, Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450002, China

2 南京中医药大学（南京 210046）, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China

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1 河南省中医院（郑州 450002）, Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450002, China

Find articles by 勇谈Author information Article notes Copyright and License information PMC Disclaimer 1 河南省中医院（郑州 450002）, Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450002, China 2 南京中医药大学（南京 210046）, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China 娟郑: moc.qq@0102uwurjz; 勇谈: moc.qq@3904856151 E-mail: moc.qq@3904856151 Received 2019 Dec 19Copyright 版权所有©《四川大学学报(医学版)》编辑部 2021Copyright ©2021 JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE EDITION). All rights reserved.Abstract目的

探讨定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。

方法

选取处于动情期的雌性SD大鼠40只，随机分为空白组、模型组、定坤丹组、戊酸雌二醇组、联合用药组，每组8只。除空白组外，其余各组大鼠建立肾阳虚薄型子宫内膜模型。空白组自由饮食，模型组给予蒸馏水灌胃，定坤丹组灌服定坤丹2.26 g/（kg·d），戊酸雌二醇组灌服戊酸雌二醇0.3 mg/（kg·d），联合用药组在戊酸雌二醇0.3 mg/（kg·d）基础上同时给予定坤丹2.26 g/（kg·d）。经过3个动情周期后，处死大鼠，取材。HE染色观察大鼠子宫内膜组织形态学变化。免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达，Western blot法检测大鼠子宫内膜中β-catenin、E钙粘蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达。

结果

与空白组比较，模型组大鼠子宫腔狭窄或增大，内膜层腺体、血管稀疏，子宫内膜变薄（POpen in a separate window图 1

HE staining showed the uterus of each group of rats. ×40

HE染色显示各组大鼠子宫。 ×40

A: Control group; B: Model group; C: Dingkun Dan group; D: Estradiol valerateon group; E: Combination group.

表 1Comparison of endometrial thickness and the expression VEGF in the endometrial tissues of rats in different groups ( )

各组大鼠子宫内膜厚度和子宫内膜组织VEGF表达（）

Groupn Endometrial thickness/μmVEGF　 *P

Immunohistochemistry showing the expressions of VEGF in the endometrial tissues of different groups of rats. ×200

免疫组化显示各组大鼠子宫内膜VEGF的表达。×200

A: Control group; B: Model group; C: Dingkun Dan group; D: Estradiol valerateon group; E: Combination group.

2.3. 对大鼠子宫内膜组织β-catenin、E-cadherin和MMP-9表达的影响

见图3、表2。与空白组比较，模型组β-catenin、E-cadherin和MMP-9蛋白表达水平均升高（POpen in a separate window图 3

Western blot showing the expressions of β-catenin, E-cadherin and MMP-9 in the endometrial tissues of different groups of rats

Western blot示各组大鼠子宫内膜组织β-catenin、E-cadherin和MMP-9的表达

A: Control group; B: Model group; C: Dingkun Dan group; D: Estradiol valerateon group; E: Combination group.

3. 讨论

薄型子宫内膜往往不能充分地增殖与分泌，致使内膜结构、生化物质分泌等方面异常而不能形成有利于胚胎着床的微环境，从而导致子宫内膜容受性降低[10]。

MIWA等[11]认为，薄型内膜的主要病理生理为腺上皮生长缓慢、子宫动脉血流高阻力，抑制VEGF的过表达，导致血管发育不良，减少子宫内膜血供，导致薄型子宫内膜形成。理想有效的薄型子宫内膜动物模型，对于防治薄型子宫内膜的发生至关重要。探索薄型子宫内膜模型较多，各有优缺点。本研究参照文献方法[8-9]建立肾阳虚薄型子宫内膜大鼠模型，与人类肾阳虚薄型子宫内膜的致病途径及病理改变相似。本研究结果发现：模型组子宫内膜明显变薄，子宫腔增大或狭窄，被覆腔上皮缺失，腺体及血管稀疏，提示成功复制肾阳虚薄型子宫内膜模型。

VEGF是一种有高度特异性的促血管生成因子，对血管生成有极强的诱导性，与血管内皮表面的特异性受体结合后可促进血管内皮细胞的有丝分裂、增殖分化，改善细胞外基质，促进内皮细胞基因表达，同时还可阻止内皮细胞凋亡及宫腔网状结构的退化而增加血管通透性[12]，从而促进大分子运转，造成纤维蛋白凝结、血浆蛋白溢出，形成血管基质物质，从而促进诱发新生血管形成和修复受损血管[13-15]。本研究发现，给药后大鼠子宫内膜VEGF 表达增加，可能有利于促进子宫内膜内皮细胞增殖、腺体的重塑、血管的新生、血管密度的增加等，可能对维持子宫内膜微循环系统的功能及内膜组织血流灌注有重要作用，从而改变子宫内膜细胞外基质的成分和结构，促进子宫内膜的生长。

β-catenin 是Wnt 经典信号通路的关键调节因子，当β-catenin 水平低下时，Wnt信号通路关闭，反之，Wnt 通路开启。本研究发现，在空白组大鼠子宫内膜组织中β-catenin低表达，E-cadherin、MMP-9的表达水平和活性相对较低，可能与Wnt经典信号通路处于关闭状态有关；而在模型组E-cadherin、MMP-9表达水平明显升高，可能与子宫内膜病理性损伤后，激活β-catenin的表达，Wnt经典信号通路开启相关。本研究结果表明，Wnt/β-catenin信号通路上的关键因子β-catenin及下游靶基因MMP-9可能参与了薄型子宫内膜的发生机制。β-catenin 是黏附分子复合体结构中的重要组成部分，在介导细胞间黏附、维持血管通透性方面有着不可忽视的作用[16]。E-cadherin是一种分布在上皮组织中的典型钙依赖型细胞表面跨膜糖蛋白[17]，是以同种分子间“拉链”式结合的形式介导细胞黏附，主要分布在细胞周边尤其是细胞与细胞的连接处，维持上皮组织正常的形态[18]，并通过与联蛋白相互作用，调节细胞的分化、增殖、凋亡以及信号转导[19]。MMP-9是MMPs家族中相对分子质量最大的一种明胶酶，可通过调节细胞外基质的合成和分解而影响细胞与基质之间、细胞与细胞之间的生物信号传递，参与降解细胞外基质成分的降解，进而调节细胞生长增殖、损伤修复、组织重塑，并能促进血管内皮细胞出芽，诱发新生血管形成[20-21]。

本研究选择肾阳虚薄型子宫内膜模型术后次日即给予药物进行预防性薄型子宫内膜形成的处理，这与人体子宫腔内子宫内膜创伤性手术后预防性给予雌激素促进子宫内膜的修复与生长，预防薄型子宫内膜形成及宫腔粘连发生机理极为相似。雌激素与子宫内膜细胞内特异性雌激素受体（ER）在细胞核内结合，形成ER复合物，激活转录通路，增强内膜细胞内的DNA和蛋白质合成，促进子宫内膜上皮细胞的增生[22]，而高剂量雌激素的效果则相反[7]。本研究还发现，各治疗组β-catenin、E-cadherin蛋白水平与模型组比较，均明显降低，定坤丹组与联合用药组MMP-9的表达水平和空白组接近，其中，联合用药组β-catenin、E-cadherin、MMP-9蛋白水平与空白组比较，差异均无统计学意义。该结果提示，各治疗组均可不同程度修复肾阳虚薄型子宫内膜受损状况，而定坤丹与戊酸雌二醇联合用药组子宫内膜与空白对照组无差异，效果更为显著。根据本研究结果可以推测，定坤丹可能通过Wnt/β-catenin信号传导途径参与大鼠肾阳虚薄型子宫内膜的修复机制。

综上所述，本研究发现定坤丹联合戊酸雌二醇能明显促进大鼠子宫内膜损伤后子宫内膜间质、腺体的分化增殖，促进新生血管的出芽与生成，增厚子宫内膜，降低β-catenin、E-cadherin、MMP-9的表达，由此可以推测定坤丹通过Wnt/β-catenin信号传导途径来预防术后薄型子宫内膜的发生，但其具体机制还有待于进一步深入研究与验证。

Funding Statement

南京中医药大学横向课题（No. 012009023024）资助

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