细菌脂多糖（LPS）elisa检测试剂盒

细菌脂多糖（LPS）elisa检测试剂盒

酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是酶免疫测定技术中应用最广的技术。1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成为分析化学领域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。

再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化水解或氧化还原反应而成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。所生成有色产物的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

人脂多糖（LPS）ELISA检测试剂盒实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人脂多糖（LPS）ELISA检测试剂盒标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4过了夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

人脂多糖（LPS）ELISA检测试剂盒操作步骤

1、 取出试剂盒，于室温(20-25)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25)内进行。

2、 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。

3、空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏水；

4、 在样品孔中加入10μl的生物素；(不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！)

5、在各孔中加入100μl的酶标记溶液；(不含空白对照孔)

6、将酶标板用封口胶密封后，37孵育反应 1小时；(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)

7、 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；(浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释)

8、酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干；

9、各孔加入显色剂A、B液各50μl；(不含空白对照孔)

10、各孔加入50μl终止液，终止反应；10、20-25下避光反应15分钟；

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