实验

2024-07-10 06:08| 来源: 网络整理| 查看: 265

实验——植物组织培养培养基的配制与灭菌

录入时间:2010-9-17 9:31:03 来源：互联网

一、实验目的 1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。 2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。 二、实验用具和药品 1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。 2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液 三、实验内容与步骤 （一）分组配制培养基。各类培养基组成如下： 1. 水琼培养基。 2. MS0培养基。 3. 1/2MS培养基。 4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。 5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。 6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。 7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。 8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。 （二）湿热灭菌培养基 1. 称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。 2. 根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。 3. 用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。 4. 分装培养基，包好或盖好，标明编号。 5. 121℃(103kPa)灭菌15-20min。 （三）作好植物组织培养的各项准备工作 1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。 2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。 3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。 四、注意事项 1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。 2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。 3. 各种母液应保存在2-4℃的冰箱中，以免变质、长霉。 4. 使用高压灭菌锅时，一定要正确操作，并提前检查其中的水是否合适。 5. HgCl2属于一种腐蚀性极强的剧毒物品，配制时要注意安全。 五、作业 1. 结合实验操作，说明培养基配制的关键环节和注意事项。配制培养基的关键环节是：根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。注意事项： 1）实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。 2）用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。 3）各种母液应保存在2-4℃的冰箱中，以免变质、长霉。 4）使用高压灭菌锅时，一定要正确操作，并提前检查其中的水是否合适。 5）HgCl2属于一种腐蚀性极强的剧毒物品，配制时要注意安全。 2. 根据组织培养原理和激素调节机理，预测所配1-8号培养基的作用？ 1）水琼培养基：组分均一，适宜各类接种物的营养生长，广泛应用于实验研究及大规模工业生产中，有利于广泛获得大量培养物。 2）MS0培养基：指无激素的MS培养基，为组织培养的基本培养基。 3）1/2MS培养基：指大量元素减半，其它为同MS培养基。 4）MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L：有利于诱导生芽。 5）MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L：有利于诱导形成愈伤组织。 6）MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L：有利于诱导生根。 7）MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L：能刺激细胞分裂，诱导愈伤组织长芽。 8）MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L：有利于愈伤组织的形成。具体哪种成分的培养基所具有的作用，因不同植物植物而异，还要通过实验进一步证明。

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