ABO血型测定

一、实验目的

1．观察红细胞凝集现象。

2．掌握ABO血型鉴定的原理。

3.学习辨别血型的方法。

二、实验原理

*血型：是对血液分类的方法，血细胞（红细胞）膜上存在的特异抗原性物质的类型。

*血型分类的依据是红细胞表面是否存在某些可遗传的抗原物质。

*红细胞凝集Agglutination：血型不相容的血液混合后，其中的红细胞聚集成簇并溶血。

*造成凝集的机制是抗原-抗体反应

*红细胞表面上含有的特异性糖蛋白抗原物质统称为 凝集原Agglutinogen。

*在血浆中则含有与之相应的特异性抗 体，称为凝集素Agglutinin。

*已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30种，包括超过600种抗原，其中大部分都非常罕见，最重要的两种为“ABO血型系统”和“Rh血型系统”。

*血型系统对输血具有重要意义，以不相容的血型输血可能导致溶血反应的发生，造成溶血性贫血、肾衰竭、休克以至死亡。

*1901年Landsteiner首先发现血型系统

*A、B抗原的前体物质是H抗原，受H基因控制，H基因产物为L-岩藻糖转移酶-1

*IA基因产物为N-乙酰-D-半乳糖胺转移酶，IB基因产物为D-半乳糖转移酶

*隐性纯合体hh个体，特殊的O型——孟买型。

*按一般血型遗传规律，O型和AB型双亲只能生下A型或B型子女。而在深圳，一对O型和AB型夫妇生下了罕见的O型和AB型的孩子。

≡血型与性格

*A型人小时候比较任性，年轻时性格果断刚毅，时时处处要强。走向社会后，随着年龄的增长和社会经验的积累，他们开始克制自己的情绪，表现出稳重谦虚的态度，容易成为不愿过份表现自己的谨慎派。A型人在老年时，则显得很固执。

*B型人大都有一个天真浪漫的幼年期，随着年龄的增长，逐渐分成心直口快和不擅交际应酬型两种倾向。B型人由于性格自幼到老变化不大，相对来说会让人感到他们越活越年轻。

*O型人年少时比较温顺，但随着年龄的增长，他们会积极地呈现出强烈的自我主张和自我表现，甚至成为非常有魄力的人。O型人从小至老的变化是最大的，往往是少年温顺，老来强硬。AB型人大多小时候怕陌生人，很闭塞，但长大以后善交朋友，交际广泛。

*AB型人因过于自信，容易自满，老年时给人感觉很傲慢。 不过他们兼具A型与B型的特质，做事有计划，但没有耐性，容易冲动，直觉敏锐，不喜欢墨守成规，性情多变，有时表现极端的个性。善于待人接物，很注意合情合理性，讨厌口是心非的人，具有强烈的批评精神。 AB型是不讲人情，不谈爱情的，男女关系在AB型看来是件极具单纯的事情，不会像其他血型的人弄得那样复杂 。

≡血型的成因

①人类的血型是由饮食和进化决定的。

②O 狩猎血型

③A 农耕血型

④B 游牧血型

⑤AB 混合血型

≡血型鉴定（正定型法）

用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。

≡RH血型系统

*人类红细胞含有一种与恒河猴  Rhesus macacus的红细胞相同的凝集原称为Rh 因子

*含Rh因子(8种，主要是D抗原)──Rh阳性

*不含Rh因子──Rh阴性

≡Rh血型的临床意义

①输血溶血

②新生儿溶血

三、实验器材与试剂

*载玻片、记号笔、刺血针、消毒牙签、酒精棉球、干棉球

*A型和B型标准血清

*离心机、 显微镜

四、实验步骤

（1）标记玻片：取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。

（2）加标准抗血清：在玻片已标记的区域内分别滴加抗A、抗B标准抗血清各l滴。

（3）加被检红细胞：在滴加抗A、抗B标准抗血清的小格中分别加被检者血液各1滴，不断轻轻转动玻片或用牙签使血清与红细胞充分混匀，连续约1～5 min，室温放置15～30min。（4）观察结果：肉眼观察有无凝集(或溶血)反应，再用低倍镜观察，判定阴性、阳性和阳性强度。

 凝集判断标准：如红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。

五、注意事项

1．所用器材必须干燥清洁、防止溶血；为避免交叉污染，各器皿均一次性使用为佳。

2．被检血液标本新鲜，无细菌污染。。

3．玻片等均应严格标记。

4．分型血清质量性能合格，从冰箱取出待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存，减少细菌污染；一般先加血清，然后再加红细胞。

5.  玻片法定型时，转动玻片动作要轻。注意防止悬液干涸，以免将玻片边缘干涸引起的红细胞凝集误认为抗原抗体反应凝集。玻片法反应时间不能少于10 min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。

6.  理论上IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20°C～24°C)内进行试验，37°C可使反应减弱。

7.  观察结果时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝集以及缗钱状形成的区别。