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一、VCS技术 这是贝克曼/库尔特(Beckman/Coulter)血细胞分析仪的专利技术。 VCS分别是体积(volume)、传导性(conductivity)和光散射(scatter)的缩写,是五分群血细胞分析仪采用的技术之一 VCS计数检测内容见表3-2 ![]() 它采用三个独立的能量来源在流动池内检测白细胞,将这三者结合,可以将白细胞分为五群(三种粒细胞和淋巴、单核细胞),见表3-3。 ![]() 以下是VCS细胞检测立体散点图: ![]() 以下是仪器给出的散点图(数字是异常成分出现的位置): ![]() 你发现了吗?血细胞分析仪给出的散点图看似是二维的,其实是三维的 【注释】 (一)正常细胞 L:淋巴细胞 M:单核细胞 N:中性粒细胞 E:嗜酸性粒细胞 (二)异常成分 1、幼稚单核细胞 2、幼稚粒细胞 3、未成熟粒细胞 4、中性杆状核粒细胞增多 5、幼稚淋巴细胞 6、异型淋巴细胞 7、小淋巴细胞增多 8、有核红细胞/血小板簇 9、大血小板 10、红细胞内寄生虫(如疟原虫) 二、电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法 这是希森美康(Sysmex)血细胞分析仪采用的技术,国货迈瑞(Mindray)血细胞分析仪采用的技术/散点图与之相似。 (一)4 DIFF(四分群)通道 利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术,采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板,白细胞膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内,使DNA、RNA和细胞器着色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例,所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深,成熟白细胞荧光染色浅,从而得到4DIFF(四分群)白细胞散点图(如下)。 ![]() (二)WBC/BASO通道 在碱性溶血剂作用下,除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩,经流式细胞术计数,可得到WBC/BASO百分率和绝对值及WBC/BASO散点图(如下)。 ![]() (三)未成熟髓细胞信息通道 采用射频、电阻抗和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸,幼稚细胞膜脂质含量高,结合硫化氨基酸的量多于较成熟的细胞,对溶血剂有抵抗作用。加入溶血剂后,成熟细胞被溶解,只留下幼稚细胞和异型/异常淋巴细胞(如下图),报告百分率和绝对值,并提示核左移。 ![]() (四)散点图解读 ![]() 【注释】 注意:部分名词已在上图下面的小字中注释 ①Ghost:影细胞 ②Lymph:淋巴细胞 ③Mono:单核细胞 ④Atyp lymph:异型淋巴细胞 ⑤Neut:中性粒细胞 ⑥Eos:嗜酸性粒细胞 ⑦Baso:嗜碱性粒细胞 ⑧Imm gran:幼稚粒细胞 ⑨Blast:原始/幼稚细胞 ⑩PLT clump(上图中写错了,下图中是正确的):血小板(聚集成)团块 ![]() 【注释】 ①Left Shift:核左移 ②Blast lympho:原始/幼稚淋巴细胞 值得一提的是,迈瑞的散点图与之类似;另外,这俩机型有时候会出现原始细胞位于正常单核细胞区域的情况,需要警惕。 (五)WNR通道 在希森美康最新的XN系列中,仪器将WBC/BASO通道和NRBC通道整合为WNR通道 以下为三维散点图:
![]() 三、钨光源散射与细胞化学方法 这是西门子(Simens)ADVIA系列血细胞分析仪采用的技术 (一)过氧化物酶(POX)染色通道 在白细胞通道加入溶血剂和POX染色剂,可计算MPXI,得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞或单核细胞的相对POX活性。形成以POX分布强度为X轴、以细胞体积为Y轴的散点图(如下图),进行白细胞计数与分类。 ![]() 【注释】 ①LUC:未染色大细胞 ②L:淋巴细胞 ③NRBC:有核红细胞 ④M:单核细胞 ⑤N:中性粒细胞 值得一提的是,有公众号水印的区域是嗜碱性粒细胞,并不是有核红细胞(NRBC);有核红细胞区在L区的下方,仔细观察,能看到那里有个箭头。 (二)嗜碱性粒细胞/核分叶性通道 苯二酸完全破坏红细胞和血小板;除嗜碱性粒细胞外,其他白细胞膜溶解,胞质溢出,仅剩裸核。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度散射,位于散点图上部;裸核则位于下部,可进行白细胞计数和嗜碱性粒细胞计数。根据不同细胞的裸核结构进行白细胞分类计数(如下图)。根据多分叶核(PMN)和单个核(MN)的比例,可计算出核左移指数(LI)。LI越高,说明核左移程度越大。 ![]() (三)未染色大细胞计数(LUC)检测 在POX通道,可检测到无POX活性、体积大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞,如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。 四、多角度偏振光散射方法 这是雅培(Abbott)CD系列血细胞分析仪的专利技术。 多角度偏振光散射法(MAPSS)应用(氦氖)激光流式细胞术,分4个角度检测细胞。嗜酸性粒细胞颗粒丰富,可消除偏振光,以此中性粒细胞相鉴别。 模式图一: ![]() 模式图二: ![]() MAPSS检测内容: ![]() (一)0°和7°散点图: ![]() (二)90°垂直角度散射光(偏振光): ![]() (三)90°垂直角度消偏振散射光(去偏振光),90°垂直角度散射光(偏振光): ![]() 鞘液中的DNA染料碘化丙啶可破坏有核红细胞膜,只留下裸核而将其染色。染料对有活性的白细胞只有极小渗透性或无渗透性,故其细胞核不染色。通过多散点图分析(MSA),可鉴别有核红细胞、无活性白细胞和脆性白细胞,计算活性白细胞比率和计数有核红细胞(如下图)。 ![]() 参考资料 1、威廉姆斯血液学(第8版),2011 2、临床检验基础(第5版),人民卫生出版社,2011 3、临床检验仪器学(第2版),人民卫生出版社,2011 4、SYSMEX XN-Series Clinical case report,Vol.1,2011 |
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