分离胶真空采血管对血清学筛查指标测定的影响

1. 引言

根据唐氏血清学筛查流程，传统分离血清的方法需要手工操作，处理步骤繁琐、血块收缩时间长，血清中常混有少量纤维蛋白凝块，可引起仪器吸样不准确、堵塞采样针，从而影响样本结果的准确性 [1]。分离胶真空采血管能较好保护样本质量，从而广泛应用于临床实验室 [2]，但是其对早、中孕期唐氏筛查指标测定结果的实际影响尚未充分研究，本文旨在探讨分离胶真空采血管对血清学筛查指标的影响，分析比较其结果。

2. 材料与方法

2.1. 样本来源

选取在滁州市妇幼保健计划生育服务中心孕检的161例早孕期孕妇和261例中孕期孕妇的血清学标本。

2.2. 采血管

真空干燥采血管(批号20220623)用于常法分离血清；分离胶真空采血管(批号20220623)分离的血清用于对比实验。

2.3. 试剂和仪器

早孕期筛查试剂妊娠相关蛋白A (PAPP-A，批号740270)、血清绒毛膜促性腺激素(HCG，批号740506)和中孕期筛查试剂游离人绒毛促性腺激素P亚单位(free β-hCG，批号698111)、甲胎蛋白(AFP，批号698111)及游离雌三醇(uE3，批号8600185168)均在全自动时间分辨荧光免疫分析仪(1235 AutoDELFIA)上完成检测。

2.4. 方法

对161例早孕期孕妇和261例中孕期孕妇用真空干燥采血管和分离胶真空采血管同时采集静脉血4 ml，将真空干燥管采集的静脉血静置于室温下约0.5~2 h，待其凝集后迅速离心(2000 rpm, 10 min)，分离得到的血清用一次性吸管转入冷冻管中检测；分离胶管采集的静脉血室温放置15 min，以3000 rpm离心10 min，而分离胶血清管可直接在全自动时间分辨荧光免疫仪上检测。

2.5. 实验的局限性

部分孕妇的血清标本存在脂血和溶血现象，尚且未知脂血和溶血会不会对分离胶测定指标的结果产生影响，为排除此种可能性，后期将进行性能验证实验。

3. 统计学方法

采用spss22.0软件进行统计数据处理及统计分析，计量资料采用( x ¯ ± s )表示，对PAPP-A、HCG、free β-hCG、AFP、uE3指标进行配对t检验。P < 0.05表示差异有统计学意义。

4. 结果

4.1. 分离胶分离血清与常法分离血清对早孕期血清学筛查指标测定结果的比较

早孕期血清学筛查指标PAPP-A和HCG在两种分离方法测定结果之间比较，差异无统计学意义(P > 0.05) (见表1)。

Table 1. Comparison of results of screening indexes in first trimester between separation gel serum and normal serum

表1. 分离胶分离血清与常法分离血清对早孕期筛查指标测定结果比较

4.2. 分离胶分离血清与常法分离血清对中孕期血清学筛查指标测定结果的比较

中孕期血清学筛查指标AFP和uE3在两种分离方法测定结果之间比较，差异有统计学意义(P < 0.05)；中孕期血清学筛查指标β-hcg在两种分离方法测定结果之间比较，差异无统计学意义(P > 0.05) (见表2)。

Table 2. Comparison of screening index determination results in middle pregnancy period between sepsis serum and normal sepsis serum

表2. 分离胶分离血清与常法分离血清对中孕期筛查指标测定结果比较

5. 讨论

分离胶真空采血管中的分离胶是具有触变性的胶体，气密性好，分离胶可将血清与血细胞完全隔开，从而避免血细胞对血清的影响而造成的实验误差。分离胶真空采血管的样本采集、运送、分离、分析、测定和保存全过程都在同一支试管，避免了交叉感染，提高了检测效率和保证了样本质量，因具有上述优势而广泛应用于临床实验室 [3]。但是分离胶的成分、性质以及血清在分离胶真空采血管中的保存条件是否会对母孕期血清学筛查结果造成影响，目前尚未得到充分研究 [4]。

PAPP-A和HCG是早期唐氏筛查标记物，PAPP-A主要是由胎盘和蜕膜产生的大分子糖蛋白，在怀孕期间，PAPP-A由蜕膜大量产生并释放到母血循环中 [5]，HCG是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种大分子糖蛋白 [6]。实验室在使用分离胶真空采血管测定样本时发现，PAPP-A和HCG的检测结果与常法分离血清测得的结果之间差异无统计学意义(P > 0.05)，说明分离胶本身对PAPP-A和HCG两种指标没有干扰，可以应用于早孕期唐氏血清学筛查的实验室检测。有研究表明 [7]，分离胶血清与常法分离血清绝大多数生化指标测定结果具有良好的可比性。AFP、free β-hCG和uE3是中期唐氏筛查标记物，AFP是一种糖蛋白，它属于白蛋白家族，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成。uE3属于一种雌激素，是雌酮和雌二醇的代谢产物，主要由胎儿胎盘单位产生 [8]。实验室在使用分离胶真空采血管和真空干燥管两种方法分离血清对比中发现，β-hcg在两种分离方法测定结果之间比较差异无统计学意义(P > 0.05)，与早孕期筛查指标研究结论一致。但是AFP和uE3在两种分离方法测定结果之间比较差异有统计学意义(P < 0.05)，说明分离胶本身的材质会对AFP和uE3的测定结果产生影响，分离胶采血管不适用于中孕期唐氏血清学筛查的实验室检测。AFP可能是由于吸附而造成结果的偏低，这种吸附可能是由于分离胶本身的材质和分离胶的生产工艺导致 [9]。两种方法分离血清对uE3测定结果的差异，还有待进一步研究，但也有学者研究发现分离胶血清管对uE3测定结果不会造成差异 [10]，受分离胶采血管质量控制等原因影响，此研究尚未达成一致性结论。分离胶中的硅分子凝聚体化学结构在离心机作用下出现变化，从而导致粘度有所下降，形成链状结构，从而将血清、血细胞分成三层。分离胶主要成分是聚苯乙烯–苯甲醛衍生物，其密度在1.04左右，一些劣质的分离胶采血管往往会因为分离胶成分纯度不达标而导致密度增加，在此过程中不容易破坏氢键，分离胶上升受到影响从而导致样本出现溶血现象，造成检测指标存在差异 [11]。后期实验中，我们将尽量选用优质进口品牌的采血管，保证研究的质量控制。

本次实验研究证明，分离胶真空采血管对早孕期母血清学筛查指标没有影响，值得广泛推广。但是其对中孕期母血清学筛查指标还是存在一定的影响，并不是完美地适用于临床实验室。由于此次实验分离胶真空采血管使用的是国产分离胶，说明国产分离胶的生产配方和生产工艺还有待进一步提高质量，以满足临床实验室各项指标测定的要求。同时临床实验室也需要通过对分离胶各项指标进行比对试验，以保证检验结果的可靠性和准确性。

NOTES

*通讯作者。

参考文献