影响凝胶过滤分离效果的主要因素

流速对分离效果的影响较大，所以在洗脱分离蛋白质样品时保持合适而恒定的流速非常重要。凝胶色谱系统中洗脱流速主要取决于凝胶柱的内径和高度、凝胶种类、颗粒大小以及分离类型等。一般在开始正式洗脱之前，先要进行预备试验以确定合适的流速。较缓的流速可使蛋白样品与凝胶基质充分平衡，达到理想的分离效果，但是流速过低会造成样品在凝胶床内的横向扩散增大，使峰宽变宽，降低分辨率。此外，还延长了洗脱时间，降低工作效率。高流速易引起洗脱峰的重叠，使本来可分开的组分重合，而且会增大柱压，影响分离效果。一般凝胶的线性流速控制在2-10cm/h。商品凝胶出厂时，商家提供的一些流速参数可供使用者参考。在一般实验中通常用蠕动泵调节流速，没有条件的可通过控制一定的高度压差来控制流速。在实验中通常使用体积流速 （mL/min），有时为了实验需要，还需将体积流速转换成线性流速（cm/h），其转换公式如下：