【衡道丨干货】冰冻切片技术分享

冰冻切片的应用

受时间和制片技术的限制，快速诊断会诊具有更多的局限性和误诊的可能性。因此，应向临床医师说明快速诊断的局限性，适用范围，慎用范围，不宜应用范围。

临床医师应于手术前向患者和患者授权人说明快速诊断的意义和局限性等，取得患者和患方的知情和理解。患者和患者授权人应在由医院制定的（手术中快速诊断患方知情同意书）签署意见和签名。

主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交快速诊断申请单，填写患者的病史、重要的影像学、实验学检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。

尽可能不在手术进行过程中临时申请快速诊断。特别应该明确的是，就像医学中的其他检查一样，只有在对病人的诊疗有益处时才适合做手术快速诊断。

冰冻切片有适用范围、慎用范围和不宜应用范围，临床医师和病理医师都应该明白，就像其他方法一样，手术快速诊断也具有相应的适用范围、慎用范围和不宜应用范围，其原则简述如下：

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适用范围

需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤/良性肿瘤或恶性肿瘤等），以即时决定手术方案的标本；了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织，有无区域淋巴结转移等；确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留；确认切除的组织，例如甲状旁腺、输卵管、输精管及异位组织等。

2

慎用范围

涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。

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不宜应用范围

疑为恶性淋巴瘤；过小的标本（直径≤0.2cm者）；术前易于进行常规活检者；脂肪组织、骨组织和钙化组织；需要依据核分裂计数判断良、恶性的软组织肿瘤；主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤；已知具有传染性的标本；需要充分取材或特殊染色才能确诊的疾病，如先天性巨结肠。

技巧分享

冰冻切片在组织学技术中应用范围较广，对病理学中的临床手术的快速诊断其意义更大，冰冻切片要求的技巧更高，以下分享几种快速冰冻切片的技巧供大家参考：

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组织温度

不同的组织，有不同的温度要求，各种不同的组织都有其最佳的冰冻切片温度，如能很好地掌握这些规律，就可制出优良的冰冻切片，如下各种组织冰冻切片要求的温度只作为参考，实际冰冻切片还需根据实际情况进行有效的调整才可切出优良完整的切片：

表1 不同组织冰冻切片温度参考

2

避免组织发脆

当切片时发现组织发脆，一般是组织冷冻过度，可将冰冻组织连同支撑器取出来，在室温中停留片刻，再进行切片，也可调高冰冻点。

3

操作方式

冰冻切片的操作方式是利用切片机的防卷板、切制组织片，调好防卷板，制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调校好，调正的位置切片时切出组织片能在第一时间顺利通过防卷板的通道，平整的平铺在持刀器的金属板上，掀开防卷板，用载玻片粘取组织片。

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多例组织切片

多例多块组织同时做冰冻切片时，应各自放置在不同的支撑器上，放置于冷冻台进行冷冻处理，然后依据不同的编号进行写标签黏附在冻头上，依次进行切片根据标签号的编写载玻片编号，才可以区分。

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载玻片粘贴技巧

① 用于黏附组织片的载玻片，应放在常温的地方，不可放在冷冻室中，这样可以保持冰冻组织片与载玻片有一定的温差，利于切片的附贴，防止脱片的概率。

② 载玻片要干净：保持载玻片干净，新买的载玻片经过正规洗涤后，在95%的乙醇内浸泡2小时，用绸布擦干或红外线烤箱烤干再使用。

③ 贴片时载玻片与刀面的角度要成30°-45°，依靠载玻片的热量将组织切片吸上来，迅速抬起，切忌压片。

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注意事项

① 防卷板及切片刀和持刀架上的板块要保持干净，需经常用毛笔扫除切片残余和用柔软的纸张擦，有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次，因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀和板上，将会破坏甚至撕裂切片，使切片不能完整切出。

② 切片前组织不能经任何固定剂浸泡，也不能接触水分，应保持干净，甚至我们可以用滤纸把组织表面的水分印干，这样才能最大限度地防止切片产生冰晶。

③ 一次性刀片，要保存在冰冻室内，便于换刀片时，不至于因刀片温度过高，一时又难以很快降温，而影响制片，在准备进行冰冻切片前可提前安装好刀片使之降温。

④ 已知具有传染性的标本（例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等），不适宜做冰冻切片，以免影响操作人员健康，冰冻切片结束后，除机器本身自带消毒设备外，也可采用紫外线照射的方法。