石莲花对TGF

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作者：

叶秋英

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摘要：

目的: 观察石莲花溶液(Graptopetalum solution,GP)对转化生长因子-β1(transforming growthfactor beta-1,TGF-β1)介导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞和人肺成纤维细胞系HLF细胞所构建的体外肺纤维化细胞模型的影响,探讨石莲花溶液是否具有抗肺纤维化的作用. 方法: 第一部分,采用TGF-β1(5 ng/mL)刺激人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞构建体外肺纤维化模型,通过形态学观察,荧光定量PCR,Western-blot及免疫组化分析A549细胞中E钙蛋白(E-Cadherin,E-Cad),Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ,Col-Ⅰ)和纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)mRNA及其蛋白的表达来鉴定模型.进而,分别对纤维化模型A549细胞给予石莲花溶液(1250μg/mL)干预并以地塞米松(Dexamethasone,DXM)(120μg/mL)作为阳性对照,干预时间均为48,72h,MTT法检测干预后各组A549细胞的增殖情况,流式细胞技术检测各组A549细胞的凋亡情况,荧光定量PCR,Western-blot和免疫组化检测各组A549细胞E-Cad,Col-Ⅰ和FN的mRNA及蛋白的表达情况.之后,运用荧光定量PCR,Western-blot和免疫组化检测石莲花对TGF-β1诱导的Smad信号通路相关蛋白Smad2,Smad4和Smad7的mRNA及蛋白的表达影响. 第二部分,采用TGF-β1(5 ng/mL)刺激人肺成纤维细胞系HLF细胞构建体外肺纤维化模型,通过荧光定量PCR,Western-blot及免疫组化分析HLF细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),Col-Ⅰ和FN mRNA及其蛋白的表达来鉴定模型.进而,分别对纤维化模型HLF细胞给予石莲花溶液(650μg/mL)干预并以地塞米松(120μg/mL)作为阳性对照,干预时间均为48,72h,MTT法检测干预后各组HLF细胞的增殖情况,流式细胞技术检测各组HLF细胞的凋亡情况,荧光定量PCR,Western-blot和免疫组化检测各组HLF细胞α-SMA,Col-Ⅰ和FN的mRNA及蛋白的表达情况.之后,运用荧光定量PCR,Western-blot和免疫组化检测石莲花对TGF-β1诱导的Smad信号通路相关蛋白Smad2,Smad4和Smad7的mRNA及蛋白的表达影响. 结果: A549细胞经5 ng/mL TGF-β1作用7天后细胞间隙增宽,细胞形态呈间质细胞的纺锤体形状样改变;与常规培养的A549细胞比较,E-Cad mRNA及其蛋白的表达明显下调(P