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摘要：
和其他国家的草药、天然药物相比,中药的一个显著特色是炮制后才能用于临床。古人云:“制药如练兵,率未练之兵不能克敌制胜,用未制之药难得药到病除”,由此可知,炮制对中药的重要性可见一斑。然而,炮制之所以对药物的药性、功效影响如此之大,究其根本是炮制对其内在物质基础的改变。研究中药炮制前后化学成分组成的变化,对阐明中药炮制的原理和制订质量标准具有重要意义。
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥根茎。生何首乌具有解毒、消痈、润肠通便之功效,用于瘰疬疮痈、风疹瘙痒、肠燥便秘、高血脂。制何首乌为何首乌的炮制加工品,具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨的功效,用于血虚萎黄、眩晕耳鸣、须发早白、腰膝酸软、肢体麻木、崩漏带下、久疟体虚、高血脂。为阐明中药何首乌炮制前后功效的改变,制订科学合理的制何首乌的质量评价方法,本文对制何首乌的化学成分进行了提取分离,在此基础上建立了区别何首乌与制何首乌的薄层层析鉴别方法,研究了制何首乌的HPLC特征图谱分析方法及与主要有效成分含量的关系,就不同炮制工艺和方法对何首乌中主要有效成分含量的影响进行了研究。
1文献综述
综合评价分析了何首乌在本草学、炮制学、质量控制、化学成分、药理学、临床应用等相关领域的研究文献,为制定切实可行的研究方案,确定研究考察指标及研究工作起点奠定了基础。
2实验研究
2.1制何首乌化学成分研究
采用50％乙醇对制何首乌进行提取,提取液减压浓缩,加水混匀,依次用乙酸乙酯、正丁醇进行提取。乙酸乙酯提取物经过柱层层析分离,得到10个化合物。通过颜色反应、熔点测定以及光谱数据(UV、MS、1H-NMR、13C-NMR.)的测定确定了其结构。10个化合物分别为大黄素(emodin)、大黄素甲醚(physcion)、丁二酸(succinic acid)、5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural)、对羟基苯甲醛(4-Hydroxybenzaldehyde)、没食酸(garllicacid)、对苯二酚(hydroquinone)、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O—β—D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glucoside)、大黄素-8-O-β—D-葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucoside)、大黄素甲醚-8-O-β—D-葡萄糖苷(physcion一8-O-β-D-glucoside)。其中丁二酸(succinicacid)和5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural)为首次在制何首乌中发现。
2.2制何首乌质量标准研究
2.2.1建立了区别何首乌生品与炮制品的薄层层析鉴别方法
目前对何首乌生品与炮制品采用相同的薄层层析鉴别方法。本文在制何首乌化学成分研究基础上,选择分离得到的5-羟甲基糠醛为对照品,采用硅胶GF254薄层板,以石油醚(60～90℃)一乙酸乙酯(1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,紫外光灯(254 nm)下检视,制何首乌色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,何首乌色谱在相应的位置上没有显相同颜色的斑点。
2.2.2制何首乌HPLC特征图谱研究
在对15个批次制何首乌饮片研究的基础上,建立了制何首乌高效液相特征图谱分析方法,最多检出峰18个。结合主要有效成分2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β—D-葡萄糖苷(简称:二苯乙烯苷)的含量测定结果,显示特征峰的检出率与含量之间呈现正相关,二苯乙烯苷含量高,则特征峰检出率高。符合药典标准的制何首乌样品特征峰检出率在88％以上,共有的色谱峰16个。
2.2.3制何首乌中二苯乙烯苷含量测定
对小同地区采购的15个批次的制何首乌中二苯乙烯苷的含量进行了测定,研究结果表明制何首乌中二苯乙烯苷含量为0.127～4.15％,表明不同地区样品之间存在很大差异,有些不符合《中华人民共和国药典》2005年版一部制何首乌中二苯乙烯苷含量不得低于0.70％的规定。
2.3炮制对何首乌中二苯乙烯苷含量的影响
针对全国不同省市何首乌炮制工艺不统一,缺乏规范的炮制工艺参数的现状,研究了不同炮制工艺即豆汁蒸、豆汁炖、清蒸、豆汁高压蒸和豆汁屉上蒸以及不同炮制时间对何首乌中主要有效成分二苯乙烯苷含量的影响。结果显示二苯乙烯苷含量:生片>豆汁高压蒸片>豆汁炖片>豆汁蒸片>清蒸片>豆汁屉上蒸片。何首乌采用黑豆汁炖,随炮制时间的延长,二苯乙烯苷含量逐渐下降。
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