免疫首先要有免疫原。
选择月龄3个月体重1.5kg的大耳白兔,饲养于标准动物房内,连续观察三天,确定情况正常后进行免疫。采用背部多点皮下注射和肌肉注射法进行免疫。具体程序如下:
第一天,初次免疫,为更好地刺激实验动物产生免疫反应,采用弗氏完全佐剂乳化免疫原,每只剂量1mg免疫原(溶于1ml 生理盐水和1ml弗氏完全佐剂中)
第14天,加强免疫,每只剂量0.5mg免疫原(溶于0.5ml 生理盐水和0.5ml弗氏不完全佐剂中)
第28天,加强免疫,每只剂量0.5mg免疫原(溶于0.5ml 生理盐水和0.5ml弗氏不完全佐剂中)
第38天,第一次血清测试从兔子耳缘静脉采血,离心分离血清,注意不要造成溶血,测定抗血清效价。
第56天,加强免疫,每只剂量0.5mg免疫原(溶于0.5ml 生理盐水和0.5ml弗氏不完全佐剂中)
第66天,第二次血清测试从兔子耳缘静脉采血,离心分离血清,测定抗血清效价。
第84天,加强免疫,每只剂量0.5mg免疫原(溶于0.5ml 生理盐水和0.5ml弗氏不完全佐剂中)
第94天,第三次血清测试从兔子耳缘静脉采血,离心分离血清,测定抗血清效价。
第112天,加强免疫,每只剂量0.5mg免疫原(溶于0.5ml 生理盐水和0.5ml弗氏不完全佐剂中)
第122天,当抗血清效价达到最高(第四次采血)时处死兔子。采用最常用的股动脉采血法(放血前兔子应禁食一天,以防血脂过高),此法得到的血量较多,每只兔子的采血量在40ml左右,且兔子不易中途死亡。
采到的血液放在离心管里,尽量避免晃动,不要盖紧以防溶血。现在室温下静置3小时,然后于4℃过夜使血块收缩。再将析出的血清全部倾入离心管中,血块于4℃,3500g离心15min,取上清液与前面的血清混合。
摘自师姐论文,
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