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转膜注意点： ① 建议用 PVDF 膜（结合蛋白效率高），因为 NC 膜结合蛋白的效率大概是 80-100ug/cm2，而 PVDF 膜能达到 155-300 ug/cm2。 ② 转膜时，准备 2 个盘子，大盘子倒上转膜液，小盘子倒上适量的甲醇。把胶从玻璃板上剥下来，切掉积层胶的部分后就浸泡在转膜液里，与胶相同大小的滤纸也浸泡在转膜液里，浸透。切好的 PVDF 膜先别急着泡到甲醇中，而是应该让它轻轻漂在甲醇液面上 10s，在这 10s 中，甲醇就足够将 PVDF 膜激活了，而且要注意在 PVDF 膜激活后不能干掉，所以我们可以先着手做三明治，等要加上 PVDF 膜时再将膜丢进甲醇去激活，一激活就立刻给装进三明治。 ③ 制作三明治时需要使用玻璃滚棒，或者拿根干净光滑的玻璃试管把膜和胶之间的气泡碾掉。 ④ 湿转条件一般设置在 200mA 恒流，2.5-3h，时间比较长，需要控制发热，因为发热会影响转膜效果。最好准备一个大冰盒装满碎冰，加点水，把转膜槽埋在冰水混合物里降温；还可以在转膜槽里加一颗磁力转子，把冰盒和转膜槽整个放在磁力搅拌器上，一遍搅拌一边转；或者直接把转膜槽塞到 4℃ 冰柜里降温。 伯乐的转膜槽发热厉害，需要控制发热；法玛西亚的转膜槽，热量控制比较好，可以做到一点都不发热。 ⑤ 半干转的三明治要保持湿润，但是三明治周围的金属板要保持干燥。 ⑥ 半干转的条件是用恒压 20V，20min-1h。如果蛋白大的可以延长转膜时间。 ⑦ 湿转能转的蛋白大小范围非常宽，普通的半干转适合转 30-120KD 大小的蛋白，有些特殊设计的半干转与湿转一样，可以转任意大小的蛋白。这需要看具体机器而定。 ⑧ 转膜液也需要用去离子水配制，转膜槽和容器需要用去离子水润洗，转膜液配方需要根据蛋白大小来调整，大蛋白（>100 kD）： SDS 1g，甲醇 0 ml；小蛋白（ |