WB实验步骤关键点合集

封闭是使未有蛋白吸附的区域被封闭，以防止抗体的非特异性结合，从而降低背景，提高检测灵敏度。常用的封闭液有5%脱脂奶粉和5% BSA或特定封闭液。

在封闭时需要特别关注以下小细节：

使用ab32034检测p27 KIP1时，不同封闭液封闭效果不同。

Lane 1: 2% BSA；

Lane 2: 5% BSA；

Lane 3: 5% NFDM/TBST。

抗体孵育通常包括一抗孵育和二抗孵育，一抗可特异性地和靶蛋白相互结合；二抗能辨认一抗的恒定区（具有物种特异性），具有放大信号的作用。

在抗体孵育时需要特别关注以下小细节：

组织培养上清

腹水

全抗血清

纯化的抗体

WB

1/100

1/1000

1/500

1g/ml

浓度估计

1-3mg/ml

5-10mg/ml

110mg/ml

二抗通常带有标签，以用作检测。常见检测手段有化学发光和荧光标记等。

在检测时需要特别关注以下小细节：

化学发光检测

荧光检测

以上就是 abcam 整理的在 WB 实验中需要注意的细节！不管你是做哪个靶点，这些技巧都是可以适用的！

担心遗漏这些细节点的小伙伴也不要着急，点击图片下载我们为您准备的 WB 实验 check list，边做实验边检查，相信一定会获得满意的实验结果！