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紫外光谱仪指南

2024-07-11 02:11| 来源: 网络整理| 查看: 265

核酸的质量控制核酸定量是分析前所采用的一种必不可少的方法,可在许多分子生物学分析中获得准确可靠的结果,例如:下一代测序(NGS)、聚合酶链式反应(PCR)、实时PCR(定量PCR;qPCR)、克隆与转染。

核酸的定性与定量控制可以通过测定核酸的纯度与浓度进行。

DNA分析方法A260和核苷酸浓度相关,A280和蛋白质的氨基酸残基相关。酪氨酸和色氨酸这两种氨基酸在280 nm处吸光,苯丙氨酸则在260 nm处吸光。这样可以直接利用吸光度测量计算A260/A280比率来检测DNA的纯度。优质DNA的A260/A280比率为1.7–2.0

蛋白质定量分析总蛋白定量的不同方法包括A280、二辛可宁酸(BCA)、Bradford、Lowry、Pierce和其他新型检测方法。由于存在具有芳香环的氨基酸,因此溶液中的蛋白质在280 nm处具有最大值,由于存在肽键,因此在大约220 nm处具有最小值。

利用Warburg公式计算浓度:

蛋白质浓度(mg/ml)= 1.55 X(A280读数)–0.76 X(A260读数)

如想了解关于使用紫外可见光谱分析DNA的更多信息,请下载《260/280比率: 蛋白质污染指标》应用手册。



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