BeyoNGS Tn5 Transposase(BeyoNGS Tn5转座酶)(D7102S)

碧云天生产的BeyoNGS™ Tn5 Transposase，中文名为BeyoNGS™ Tn5转座酶，是一种来源于E.coli、经过改造具有极高活性的Tn5转座酶突变体，可以高效地将Tn5转座子(Transposon)随机插入到目标序列，对于真核和原核生物的DNA都有极高的转座插入效率。本产品可以特异性识别两端含有嵌合末端序列(Mosaic End sequence, ME)的DNA片段(包括含有ME序列的引物)，最终形成Tn5转座体(Tn5 Transposome)，该转座体可以随机结合靶DNA并切割插入其携带的DNA片段。Tn5转座酶被广泛用于体外转基因(外源基因整合到宿主细胞)和二代测序(Next Generation Sequencing, NGS)建库等领域。

转座子(Transposon)，也称为转座元件(Transposable elements, TEs)、跳跃基因(Jumping genes)，是一种可以在基因组中“跳跃”到不同位置的遗传元件(Genetic elements)。尽管转座子经常被称为跳跃基因，转座子还是会相对比较稳定地存在于相应的整合位点，并且大部分转座子最终会变得没有跳跃活性。转座子最早由Barbara McClintock在玉米中发现，并在1983年获得了诺贝尔生理医学奖。后续研究发现转座子系统广泛存在于生物界，并逐渐研究开发成为基因分析的有效工具。

BeyoNGS™ Tn5转座酶是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组蛋白，与野生型Tn5转座酶相比，其插入效率至少提升1000倍，具有转座随机性好、稳定性高、插入位点易测序等特点。

图1. 碧云天的BeyoNGS™ Tn5 Transposase的工作原理图。

BeyoNGS™ Tn5 Transposase与Tn5 Transposase的工作原理相同。Tn5转座酶的工作原理如图1所示。当转座事件发生时，两个Tn5转座酶分子结合到供体DNA (Donor DNA)的转座子的ME序列，形成两个Tn5转座酶分子与供体DNA的复合物①，随后两个Tn5转座酶分子通过C末端相互作用进行联会并环化(Circularization)转座子，形成一个Tn5转座酶二聚体复合物 (Transposase dimer complex)②，在Mg2+存在的条件下，Tn5转座酶切割供体DNA，并携带供体DNA片段离开供体链形成转座体(Transposome)③，当Tn5转座体识别靶点DNA (Target DNA)，也称受体DNA (acceptor DNA)，并结合到随机靶序列(Target site)上形成转座体与靶序列的复合物④，在Mg2+存在条件下，会对靶序列进行切割，将其携带的供体DNA片段插入靶序列中，形成转座后的DNA序列(Transposed DNA)⑤，切割形成的9bp粘性末端可以通过DNA聚合酶、连接酶作用进行填补，最终两端形成9bp正向重复序列。基因从供体DNA通过Tn5转座酶“剪切”之后“粘贴”到另一受体DNA，实现了基因片段在基因组中的“跳跃”。

产品用途：本产品可用于二代测序(NGS)文库构建时的片段化和加接头；将测序引物引入克隆DNA或质粒；细菌基因敲除库的建立；新型细菌菌株工程改造；目的基因的插入失活；将T7转录启动子、抗性标记等插入靶DNA等。

酶储存溶液：50mM HEPES (pH7.2), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol。

Reaction Buffer (5X)：50mM HEPES (pH7.2), 500mM NaCl, 50mM MgCl2。

Stop Buffer (5X)：50mM EDTA (pH8.0)。

用于体外转座子插入反应时，按每次使用1μl BeyoNGS™ Tn5 Transposase (40μM)，本产品小包装D7102S可以进行20次反应，中包装D7102M可以进行100次反应。

-20℃保存，一年有效。

BeyoNGS™ Tn5 Transposase (40μM)含50%甘油，在-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，否则会冻结，反复冻融可能会影响Tn5转座酶的活性。

BeyoNGS™ Tn5 Transposase (40μM)较为粘稠，吸取时注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。

BeyoNGS™ Tn5 Transposase催化的底物为DNA，不能用于RNA实验。

本产品用于转座子插入时只适用于细菌，真核细胞由于核膜的阻挡导致转座子难以插入。具体的反应条件请根据相关文献自行设计和调整。

用于细菌相关研究时，请勿使用化学感受态细胞，化学转化的成功概率极低。推荐使用电转化效率不低于106cfu/µg的电转感受态细胞。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。