TRBC1在成熟T细胞淋巴瘤中的表达特点及诊断价值

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分析TCRβ链恒定区结构域蛋白TRBC1在成熟T细胞淋巴瘤（TCL）中的表达特点，并与TCRVβ分析和TCR基因重排结果比较，探索TRBC1在TCL诊断中的价值。

通过多参数流式细胞术（FCM）检测南京医科大学第一附属医院血液科收治的30例TCL患者（TCL组）、40名正常对照和50例无T淋巴细胞增殖性疾病患者（非TCL组）TRBC1的表达特点，同时分析TCRVβ受体库检测、TCR基因重排与TRBC1限制性表达检测在TCL中的诊断价值。

正常对照组CD4+T和CD8+T细胞亚群TRBC1阳性表达率分别为（39.6±6.5）％和（39.3±4.4）％，非TCL组患者CD4+T和CD8+T细胞亚群TRBC1阳性表达率分别为（39.1±3.8）％和（36.0±8.4）％，TRBC1表达在两组中均呈双相表达模式。TCL组患者均为CD3+TCRγδ−，TRBC1阳性表达率>92.3％或表1成熟T细胞淋巴瘤（TCL）组与非 TCL组及正常对照组基线临床特征比较临床特征TCL组（30例）非TCL组（50例）正常对照组（40例）P1值P2值性别（男/女，例）17/1328/2221/190.950.73年龄［M（范围）］52（12～77）58（20～73）44（30～56）0.400.01WBC［×109/L，M（范围）］28.6（2.2～529.5）24.7（3.6～417.9）5.9（3.9～12.1）0.090.01HGB［g/L，M（范围）］108.0（43.0～157.0）95.0（34.0～140.0）132.0（129.0～155.0）0.070.01PLT［×109/L，M（范围）］155（28～219）190（19～344）188（109～320）0.050.01ALC［×109/L，M（范围）］21.9（0.2～151.5）18.6（1.0～390.3）2.5（0.9～5.1）0.650.01标本类型（骨髓/外周血，例）23/727/230/400.040.01骨髓浸润（例）241700.010.01Open in a separate window

注：ALC：淋巴细胞绝对计数；P1：TCL组与非TCL组比较；P2：TCL组与正常对照组比较

2. TRBC1在正常对照组和非TCL组中的表达情况：采用FCM评估非TCL组（50例）和正常对照组（40名）CD4+T和CD8+T细胞亚群中TRBC1的表达。两组研究样本的CD4+T或CD8+T细胞均显示出TRBC1双相表达模式，即TRBC1高表达和TRBC1低表达两种类型群体（图1、2），高表达组间与低表达组间细胞分布比例的差异均无统计学意义（P值均>0.05）。正常对照组CD4+T和CD8+T细胞亚群TRBC1+表达率分别为（39.6±6.5）％和（39.3±4.4）％（P>0.05），非TCL组CD4+T和CD8+T细胞亚群TRBC1+表达率分别为（39.1±3.8）％和（36.0±8.4）％（P>0.05）。两组间CD4+和CD8+T细胞亚群的TRBC1+表达率非常接近（P>0.05），CD4+T细胞TRBC1+表达略高，CD2、CD5、CD7表达均在正常范围。

蓝色：CD4+细胞；绿色：CD8+细胞

蓝色：CD4+细胞；绿色：CD8+细胞

3. TCL中TRBC1的表达情况：应用多参数FCM检测30例TCL患者的免疫表型，结果显示肿瘤T淋巴细胞均为CD3+TCRγδ−，TRBC1+表达率>92.3％或Open in a separate window图3正常对照组、非TCL组和TCL组TRBC1+表达率

TCL：成熟T细胞淋巴瘤；aP95.7％或Open in a separate window图4成熟T细胞淋巴瘤（TCL）中TRBC1表达情况

A、B：CD4+TCL中TRBC1表达情况；C：CD4+CD8+TCL中TRBC1表达情况；D、E：CD8+TCL中TRBC1表达情况；F：CD4−CD8−TCL中TRBC1表达情况。红色：肿瘤T细胞；蓝色：CD4+细胞；绿色：CD8+细胞

4. TCR基因重排分析和TCRVβ亚家族的表达特点：28例TCL中（其中2例未做TCR基因重排检测），TCRβ和TCRγ的阳性检出率分别为85.7％和78.6％，两者联合阳性检出率为92.8％，16例非TCL TCR基因重排均为阴性。17例TCL患者应用TCRVβ流式试剂盒进行检测，24种TCRVβ亚家族中呈限制性表达或阴性表达者16例，其中克隆性T淋巴细胞发生率最高的亚家族成员是TCRVβ13.2和TCRVβ5.2，TCRVβ亚家族呈均态表达者1例，敏感性为94.1％（图5）。

A：TCRVβ在对照管中呈正常表达模式；B：TCL组中TCRVβ13.2阳性率为85.1％，显著高于对照管（PTRBC1检测、TCRVβ检测和TCR基因重排检测的一致性TRBC1表达TCRVβ检测TCR基因重排阳性阴性阳性阴性单克隆161271多克隆04016 Kappa值0.860.95P值0.010.01Open in a separate window讨论

TCL的诊断主要依赖细胞形态学、免疫表型和分子特征，如通过PCR检测TCR基因重排和FCM检测TCRVβ受体库等。由于上述方法价格昂贵且检测费时费力，很难推广，且需特殊试剂盒及仪器，难以在常规实验室开展，因此临床迫切需要一种快速准确的检测方法以优化当前诊断模式。TCR是成熟T细胞表面可识别并结合抗原的分子结构，TCRβ链恒定区域包括TRBC1和TRBC2两种基因[10]。正常细胞同时表达TRBC1+T细胞和TRBC2+ T细胞亚群，而TCL由于T细胞亚群克隆性增殖，仅表现为TRBC1+ T细胞或TRBC2+ T细胞单一亚型。由于目前尚无商品化TRBC2抗体，实际临床工作中通过检测TRBC1表达特点可判断是否存在表达异常，如检测TRBC1蛋白出现单型性或限制性表达，可作为诊断TCL的重要依据[11]。

在本研究中，我们采用包括TRBC1和T细胞相关9色抗体组合方案进行检测，发现TRBC1在肿瘤T细胞和正常T细胞中的表达存在显著差异，在非TCL组和正常对照组中CD4+T和CD8+T细胞亚群均显示出TRBC1双相表达模式，而在30例TCL中克隆性T细胞呈TRBC1单相表达模式。本研究表明，通过FCM检测肿瘤T细胞免疫表型是一种准确、可靠、简单的方法，可用于评估多种成熟T细胞肿瘤的克隆性。不仅是外周血和骨髓标本，还可通过检测淋巴结标本中的TRBC1免疫表型区分肿瘤T细胞和非肿瘤T细胞。TRBC1仅需一个抗体就能够覆盖所有CD3+TCL克隆性筛查，联合多个T系相关抗原进行设门和分析不仅更加灵活简便且节约标本和成本，更加适合临床推广。

临床工作中，TCR基因重排检测在T细胞克隆性检测中应用较为广泛。本研究采用TCR基因重排检测TCL克隆性的敏感性和特异性分别为89％和100％。基因扫描技术是TCR基因重排的一种分子学方法，相对简单灵敏，可检测0.5％～1％的单克隆T细胞，但该方法价格昂贵且假阳性率高[12]。另外，利用TCRβ或TCRγ重排阳性无法判断是αβ型还是γδ型TCL[9]。目前FCM检测TCRVβ受体库虽然可以能够检测24种TCRVβ亚家族，但也仅覆盖了70％左右的TCR受体亚家族。TRBC1检测TCR恒定区，因此稳定性更好，可以作为诊断T细胞克隆性的有效证据。需要注意的是，无论是TRBC1还是TCRVβ受体库检测方法，均限于检测TCRαβ亚型，不适用于TCRγδ+T细胞或CD3−细胞（如正常胸腺细胞、CD3阴性肿瘤和非常罕见的CD3阴性小反应亚群）的克隆性评估。在本研究中，1例外周T细胞淋巴瘤患者在有效治疗后TRBC1阳性率接近正常范围，提示TRBC1可用于αβTCL的治疗监测。有文献报道TRBC1抗体对成熟T细胞肿瘤的敏感性和特异性分别为97％和91％[13]。但在我们的研究中，TRBC1检测克隆性αβTCR亚群的敏感性为100％，我们认为是由于本研究采用9色抗体组合方案进行检测，因此更为敏感。本研究建议，通过TRBC1表达模式评估克隆性应采用定量和定性相结合的分析策略，需要更多更全面的含有TRBC1的T细胞抗体组合方案识别异常T细胞。值得一提的是，由于近期T细胞意义不明的克隆受到越来越多的关注[14]，需要更多色组合以利用不同免疫表型的表达特点综合分析，采用设门和反设门结合策略以发现可能隐藏在正常T细胞中的微小T细胞克隆。

利益冲突 所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明 张宁涵：酝酿和设计实验、实施研究、采集数据、分析/解释数据、起草文章、统计分析；陈肖：分析/解释数据、统计分析；赵四书：实施研究、行政、技术或材料支持；乔纯：行政、技术或材料支持、支持性贡献；刘露：统计分析；李建勇：获取研究经费、行政、技术或材料支持、支持性贡献；吴雨洁：对文章的知识性内容作批评性审阅、获取研究经费、行政、技术或材料支持、指导、支持性贡献