TALDO1 Knockout A2780 Cell Pool

01.  在 37℃水浴中预热完全培养基。 02.  将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。 03.  将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。 04.  拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。 05.  在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。 06.  用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。 07.  将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。 08.  参考传代比例：1/3 到 1/4 传代，2-3 天长满。

01.  待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。 02.  将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。

03.  从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。 04.  为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。 05.  加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL）  ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。 06.  将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。 07.  移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。 08.  盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。

01.  准备冻存液，并提前预冷。 02.  确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。 03.  对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程） 04.  按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。 05.  将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。 06.  后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。