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Hiper Canace HF DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15sec/kb。本制品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。  基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
 用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30min内，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
组分10U100U500U1000UHiper Canace HF DNA Polymerase(2U/μL)5μL50μL250μL2×250μL2×Canace PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)300μL3×1mL15×1mL30×1mL保存：-20℃，有效期2年。
核酸外切酶残留检测：10U本制品和0.5μg λDNA(Hind III)，37℃下孵育4h，DNA的电泳谱带无变化。切口酶残留检测：10U本制品和0.5μg IL23R质粒，37℃下孵育4h，DNA的电泳谱带无变化。
PCR反应体系(推荐冰上配制)成分用量终浓度H2O至50μL-2×Canace PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)25μL1×DNA模板适量-Primer正向(10μM)2.5μL0.5μMPrimer反向(10μM)2.5μL0.5μMHiper Canace HF DNA Polymerase(2U/μL)0.5μL1U/50μL注：试剂使用：使用前要充分解冻混匀。聚合酶浓度：推荐使用1U/50μL。可以在0.5～2U/50μL之间进行优化，请勿超过2U/50μL。聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5mM。如有特殊需要，可用50mM MgCl2，以0.2～0.5mM为间隔向上摸索。高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。不同模板的推荐使用量(50μL反应体系)：模板种类扩增片段1kb～20kb基因组DNA50ng～200ng质粒或病毒DNA10pg～20ngcDNA1～5μL (不超过PCR反应总体积的1/10)PCR扩增程序步骤温度时间循环数预变性98℃0.5～3min1变性98℃10sec30-35退火60℃20sec延伸72℃15～30sec/kb终延伸72℃5min1注：预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min；高GC含量模板为5～10min。退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20sec，可以在10～30sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30sec/kb，根据实际情况可延长至40sec/kb。扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。  图1．Hiper Canace高保真DNA聚合酶扩增2.1kb～6kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50ng/50μL；退火温度：60℃；延伸时间：30sec/kb。M：1kb ladder；1：2.1kb；2：3.1kb；3：4.2kb；4：5kb；5：6kb。相关搜索：高保真DNA聚合酶，Hiper Canace High-Fidelity DNA Polymerase
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