ELISA实验指南！！新手必读

►OD值：空白孔OD值≤0.1（夹心法）；标准品最大OD值≥1.2。样本OD值应落在标准曲线范围内。

►线性范围：标准曲线的线性回归相关系数R2≥0.99。

ELISA实验结果计算

作为ELISA实验的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。

我们以夹心法为例，来介绍ELISA实验结果计算。

● ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%；

● 样本的OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值；

● 建立标准曲线：在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X轴上为标准品浓度，Y轴为对应的OD值）。推荐使用origin软件。

Origin软件可自行百度下载

详细步骤如下：

第一步：输入标准品浓度和OD值

第二步：选择拟合曲线类型——非线性曲线拟合

选中输入的数值框，按如下操作依次点击选项。

第三步：选择Statistics和Logistic，勾选“Find X from Y”

完成上述操作后，点击Fit按键，拟合曲线和相关信息将自动生成（如第四步所示）。

第四步：查看标准曲线信息（如参数值，R-Square等）

第五步：修改横纵坐标标题，设置坐标轴类型为对数

双击第四步中的拟合曲线图，对其进行编辑。双击修改横纵坐标的标题，双击X轴、Y轴，设置坐标类型为“Log10”，并设置横纵坐标范围。

第六步：根据标准曲线计算样品浓度

选择第四个工作表（Fit NL Find X from Y1），在左列输入样本的OD值，对应的浓度将在右列自动生成。

ELISA夹心法和竞争法的标准曲线图

注意：

如果样本的OD值超出标准曲线的上限，请在实验前适当稀释样本，以获得精确结果。分析数据时，样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘以稀释倍数。返回搜狐，查看更多