化学发光磁性微球包被抗体的影响因素分析！

不同活性基团磁性微球的应用或偶联抗体方法不同，今天小编分享一下Bioeast羧基磁性微球包被抗体中的一些影响因素。

羧基磁性微球包被原理

Bioeast Mag-COOH磁性微球表面有羧基（COOH）修饰，在碳化二亚胺（EDC）活化下可与蛋白共价结合。EDC反应形成的中间体在水中不稳定，容易水解，为了防止活化后的中间体快速水解，提高偶联效率，可在反应中添加N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠（Sulfo-NHS），以形成更稳定的中间体。

羧基磁性微球偶联原理

一步法与两步法包被对比

使用A、B、C三个不同检测项目，包被抗体同时采用以下方案进行包被：

(1) 一步法包被羧基磁性微球，实验编号：1步

(2) 仅使用EDC进行活化两步法包被羧基磁性微球，实验编号：2步-EDC

(3) 使用EDC+NHS进行活化的两步法包被羧基磁性微球，实验编号：2步-EDC+NHS

按照控制变量法原则，对不同包被工艺下的磁性微球进行测试验证。

Eva.1

 A项目-一步法两步法包被对比

A项目一步法与两步法包被后发光值曲线对比

A项目各样本点发光值比值

比值%=(其他包被方案下测值（RLU）)/(1步法包被方案下测值（RLU）)×100--（式1）

A项目中两种2步法包被方案下C2~C6的发光值显著高于1步法，从各点发光值比值来看，两步法-EDC+NHS的方案C1（本底）更低，且C2~C6值更高。

Eva.2

 B项目-一步法两步法包被对比

B项目一步法与两步法包被后发光值曲线对比

B项目各样本点发光值比值：参见式1

B项目中1步法包被方案下的整体（C1~C6）发光值均高于两种2步法，但2步法的结果C1（本底）值更低。

Eva.3

C项目-一步法两步法包被对比

C项目一步法与两步法包被后发光值曲线对比

C项目各样本点发光值比值：参见式1

C项目中两种2步法包被方案下C2~C6的发光值显著高于1步法，从各点发光值比值来看，两种2步法的方案发光值无显著差异。

讨论

 不同的检测项目，在三种包被方案下显示的发光值差异也不同。

两种两步法方案中，有NHS参与反应的检测结果均稍优于无NHS参与反应的方案。

不同检测项目或包被抗体，在不同包被方案下的性能优劣也不同，仅从目前展示的3组实验结果来看，两步法适用性更好一些，但一步法包被流程相比两步法更简易一些。我们建议：在您的应用过程中，包被方案采用1步法还是2步法可以进行对比试验；如果您采用两步法方案，我们更推荐您使用有NHS参与反应的方案。

包被pH对比

使用A、B两个不同检测项目，包被抗体同时采用一步法和两步法方案进行包被。按照控制变量法原则，对不同包被pH下的磁性微球进行测试验证。

注：本实验两步法方案为EDC和NHS参与反应;包被pH指包被缓冲液的pH值。

Eva.4

 A项目-包被pH对比

A项目-一步法与两步法不同包被pH发光值曲线对比

A项目各样本点发光值比值

 比值%=(其他包被方案下测值（RLU）)/(2步pH5.0包被方案下测值（RLU）)×100--（式2）

1步法包被方案下，随着pH值的升高，发光值出现了急速的下降，而2步法在同样条件下发光值下降比率明显低于1步法。1步法和2步法包被的过程中，目测未观察到明显的凝聚现象。

Eva.5

 B项目-包被pH对比

B项目-一步法与两步法不同包被pH发光值曲线对比

B项目各样本点发光值比值：参见式2

讨论

2步法和1步法包被方案下A、B项目均在pH=5时发光值最高。

1步法在不同包被抗体、不同包被pH条件下会有不同程度的凝聚。

不同项目和不同的包被方案对pH值的敏感程度有差异，本实验室推荐包被pH=5.0。但由于不同项目或抗体的差异，为获得最优包被条件，建议您在应用时做pH梯度的筛选，筛选范围推荐pH4.0~7.0。

博岳生物磁珠系列

声明：本微信注明来源的稿件均为转载，仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，我们第一时间更正，谢谢！