慢病毒包装与浓缩的详细Protocol送给你！

2.取两个无菌1.5mlEP管，分别加入200µl无血清DMEM，其中一个EP管内加入1.5µg含有目的基因的病毒载体核心质粒和1.5µg病毒包装质粒，病毒包装质粒可按照pMDL:VSVG:REV=5:3:2比例加入；另一个EP管中加入6µl lipo2000。

3.静止5分钟。然后将两管充分混匀，静置15-20min。

4.将步骤3中的混合液逐滴加入细胞培养皿中，轻轻摇动平皿混匀，然后置于含5％CO2的37℃温箱孵育。

4. 10h-16h后吸去培养基，加入适量37℃预热的完全培养基，继续将细胞放置温箱孵育。

5.转染后24h、48h、72h左右收集含慢病毒的上清。1500rpm离心五分钟。

6.将待转染的实验细胞平铺于35mm培养皿，12-24h后换液，最佳密度为30%－50％。第一次加入转染后24h收集的病毒液培养。可根据情况进行病毒液的再次感染。细胞长满后传代或者检测表达。

如果一次包装的病毒液体积较大，可以通过PEG8000进行慢病毒液的浓缩，PEG 是环氧乙烷和水缩合而成的水溶性非离子型聚合物， 多用于浓缩病毒。

二：慢病毒浓缩过程

1. 配制5X PEG8000：

NaCl 8.766 g;

PEG8000 50g；

200ml Milli-Q纯水；

溶解后将液体至于121℃ 高温灭菌30min；将灭菌后母液保存在4℃。

2. 使用0.45μm滤头过滤转染后24h、48h、72h左右收集含慢病毒的上清液；

3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000 NaCl母液7.5 ml；

4. 每20～30min混合一次，8字摇匀，共进行3-5次；

5. 4℃放置过夜；

6. 4℃，4000 g，离心 20min

7. 吸弃上清，静置管子1～2min，吸走残余液体；

8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；

9.将溶解病毒悬液分装，储存在-80 ℃，按需取用。返回搜狐，查看更多